Qualitative Analyse der PCR für Hepatitis C

Hepatitis ist eine schwere Krankheit, die viele Ursachen hat. Grundlage seiner Entwicklung ist die direkte oder indirekte Schädigung der Leber. In Anbetracht seiner Bedeutung für den gesamten Organismus kann man nur vermuten, wie schwierig die Pathologie ist. In diesem Artikel werden die Merkmale der Verlaufs- und Labordiagnostik von Hepatitis C genauer untersucht.

Die Ursache der Erkrankung ist ein viraler Wirkstoff, der sich auf RNA-haltige Erreger bezieht. Es hat eine Besonderheit - die Fähigkeit, zu mutieren, dh seine Struktur zu verändern. Dadurch entzieht sich die Infektion dem Angriff des Immunsystems und führt in den meisten Fällen zu chronischen Entzündungen in der Leber.

Angesichts der Existenz verschiedener Subtypen des Virus sollte die Auswahl der Medikamente auf den Ergebnissen der Genotypisierung basieren. Trotz einer langen Untersuchung der Krankheit und der Merkmale der HCV-Struktur war es bisher nicht möglich, einen spezifischen Impfstoff für die Krankheit zu entwickeln.

Die Schwierigkeiten der Früherkennung liegen im asymptomatischen Verlauf der Hepatitis, wodurch eine Person im Stadium der Zirrhose einen Arzt aufsucht. Um eine Krankheit rechtzeitig zu erkennen, sind regelmäßige ärztliche Untersuchungen erforderlich. Nur durch Labortests von Blut ist es möglich, HCV zu erkennen und eine Infektion Ihrer Umgebung zu verhindern. Tatsache ist, dass der Träger der Infektion lange Zeit nicht über die Pathologie erraten kann und das Virus weiterhin auf gesunde Menschen übertragen kann.

Übertragungswege

In den meisten Fällen breitet sich das Virus durch das Blut aus, da es die höchste Konzentration an Krankheitserregern enthält. So wird die Infektion übertragen:

• mit Hämodialyse;
• mit einer infizierten Nadel;
• im Kampf, wenn die Haut verletzt ist und Blutkontakt auftritt;
• mit Bluttransfusion (Bluttransfusion).

Die Infektionswahrscheinlichkeit während der Intimität ist unbedeutend, da im Samen und in der Scheide nur wenige Erreger vorhanden sind. Das Infektionsrisiko ist deutlich erhöht, wenn die Schleimhaut der Genitalien nicht verletzt wird. Dies wird bei aggressivem und analen Sex beobachtet.

Der vertikale Übertragungsmodus wird im Arbeitsprozess ausgeführt. In der Schwangerschaftszeit des Fötus kann der Erreger nicht durch die Plazenta in den Embryo eindringen. Bei der natürlichen Geburt wird der Erreger auf das Kind übertragen, wenn die Haut verletzt wird, wenn der Kontakt mit dem Blut der Mutter beobachtet wird.

Nach dem Eindringen des Erregers in einen gesunden Organismus beginnt die Synthese von Antikörpern, die vor Infektionen schützen und zu Immunstrukturen gehören. Sie werden in der ersten Studie einer Person mit ELISA gefunden.

Zur Bestätigung der Diagnose wird der Patient einer Polymerase-Kettenreaktion unterzogen. Es ist eine Analyse des genetischen Materials eines Erregers und die Bestimmung der Viruslast.

Labordiagnostik der Hepatitis C

Die Labordiagnostik beginnt mit einem Enzymimmunoassay. Ihre Hauptaufgabe ist der Nachweis von Antikörpern gegen den Erreger. Sein Wirkungsgrad beträgt fast 95%. Dank dieser Forschung ist es möglich, den Virenträger in der präklinischen Phase zu identifizieren und zur weiteren Untersuchung zu senden.

Eine qualitative Analyse des ELISA zeigt das Vorhandensein oder Fehlen von Immunglobulinen im Blut des Patienten an. Das Ergebnis kann "positiv" oder "negativ" sein. Nachdem Sie die erste Antwort erhalten haben, wird die Person zur nächsten Untersuchung (PCR) geschickt. Der Preis hängt von der Qualität der Reagenzien und des Labors ab. Die Kosten der Polymerase-Kettenreaktion können 4 Tausend Rubel erreichen.

PCR-Funktionen

Mit einer Polymerase-Kettenreaktion können wir sogar mit einer kleinen Menge biologischen Materials die Viruslast im Blut abschätzen, dh die Konzentration der Erreger in einem Milliliter Flüssigkeit berechnen.

Mit dem Aufkommen der PCR ist die Diagnose von Hepatitis viel einfacher geworden. Die Analyse ermöglicht es, HCV-RNA zu identifizieren, das Stadium des Infektionsprozesses und die Infektiosität des Virusträgers festzulegen.

Es gibt verschiedene Arten der genetischen Diagnose:

1. Qualitative Analyse der PCR für Hepatitis C - bestätigt das Vorhandensein oder Fehlen von HCV im Blut des Subjekts:
2. quantitativ, mit dem Sie die Konzentration von Viren berechnen und das Krankheitsstadium feststellen können. Das Ergebnis wird in IE / ml oder Kopien / ml angegeben (je nach Labor).
3. Genotypisierung - notwendig zur Bestimmung des HCV-Genotyps. Dies ist für die genaue Auswahl von Medikamenten erforderlich, die in diesem Fall am effektivsten sind. Die Analyse zeigt indirekt den Schweregrad des pathologischen Prozesses in der Leber. Im dritten Genotyp des Erregers wird daher meistens Steatose beobachtet, deren Grundlage die Akkumulation von Fett in Hepatozyten (deren Zellen) ist. Außerdem beeinflusst die Art des Virus das Ergebnis und die Dauer des therapeutischen Verlaufs.

Qualitative Analyse der PCR für Hepatitis C

Zunächst wird biologisches Material im Labor auf HCV-RNA untersucht. Es ist wichtig zu wissen, dass eine qualitative Analyse von Hepatitis C eine gewisse Empfindlichkeit aufweist und daher nicht immer die richtige Antwort gibt. In diesem Fall wird empfohlen, die Labordiagnostik mit anderen Reagenzien erneut durchzuführen.

Um verlässliche Ergebnisse zu erhalten, sollten Testsysteme mit einer Empfindlichkeit von mindestens 50 IE / ml verwendet werden.

Das Diagnoseergebnis kann entweder "positiv" oder "negativ" sein. Wenn der Erreger nicht im Blut gefunden wird, ist die Studie abgeschlossen. Wenn ein Erreger in der Probe nachgewiesen wird, wird die Viruslast quantifiziert.

Eine falsch-negative Antwort wird erhalten, wenn der Prozess verletzt wird, z. B. wenn aktive Komponenten den Aufbau von Kopien des Erregers unterdrücken, die in das Medium gelangen. Daher ist es nicht möglich, ein echtes Blutbild darzustellen, weshalb die Infektion einer Person nicht diagnostiziert wird.

Ein falsch positives Ergebnis kann erhalten werden, wenn das Röhrchen für die Sammlung von biologischem Material sowie die Umgebung für die Studie kontaminiert waren. Außerdem ist eine solche Analysereaktion bei gemischten Infektionen möglich, wenn die Leber von mehreren Viren, beispielsweise Hepatitis C und D, betroffen ist.

Indikationen für die qualitative Forschung

Der Arzt kann einem Patienten eine qualitative Studie zur Identifizierung von RNA des Hepatitis-C-Virus vorschreiben:

• bei Erhalt einer positiven oder zweifelhaften Enzymimmunoassay-Reaktion;
• zur Überprüfung der Diagnose;
• Viruslast bestimmen;
• das Stadium der Krankheit festlegen;
• Diagnose einer Mischinfektion. Hepatitis C infiziert die Leber oft gleichzeitig mit dem "D" -Virus.
• Bestimmung der therapeutischen Taktik unter Berücksichtigung des Pathogen-Genotyps;
• Beurteilung der Dynamik von Veränderungen während der Behandlung mit antiviralen Medikamenten.

Die Vorteile der Polymerasekettenreaktion umfassen:

1. hohe Empfindlichkeit der Technik, die es erlaubt, die Infektion im präklinischen Stadium festzustellen;
2. Identifizierung des genetischen Materials des Erregers und nicht seiner Antikörper;
3. die Möglichkeit, einen Subtyp eines Krankheitserregers zu bestimmen;
4. Hohe Diagnoserate, da kein Animpfen des Materials auf dem Nährmedium erforderlich ist und es ausreichend ist, bestimmte Testsysteme zu verwenden. Eine Person erhält das Ergebnis nach 5 Stunden;
5. Vielseitigkeit. Die Analyse erlaubt die Identifizierung von genetischem Material (RNA, DNA). Dank dessen kann der Arzt Hepatitis C und andere Arten der Erkrankung bestätigen (B);
6. die Fähigkeit, latente Infektion zu erkennen.

Quantitative Forschung

Bei der Untersuchung von Blut unter Verwendung der Polymerase-Kettenreaktion kann die Anzahl der Pathogene in einem festen Volumen an biologischem Material berechnet werden. Der Indikator wird in IE / ml angegeben. Durch die Analyse ist es möglich, den Grad der Ansteckung des Patienten zu bestimmen, das Stadium des Infektionsprozesses zu bestimmen und auch die Wirksamkeit der medikamentösen Therapie zu bewerten.

Auf der Basis der PCR entscheidet der Spezialist, welche Wirkstoffdosen die Vermehrung von Krankheitserregern blockieren können. Darüber hinaus werden die Dauer der antiviralen Behandlung und die Prognose auf Lebenszeit bestimmt. Es ist wichtig zu wissen, dass Testsysteme eine hohe Sensitivität haben. Daher ermöglicht das Verfahren die Bestätigung der Infektion einer Person im präklinischen Stadium.

Genotypisierung

Angesichts der Fähigkeit des Erregers, zu mutieren, ist sein Genotyp notwendig, um die Taktik der Behandlung und die Auswahl antiviraler Medikamente zu bestimmen. Beispielsweise dauert die Behandlung von HCV 1 48 Wochen, wobei ein positiver Trend nur in 60% der Fälle beobachtet wird. Die Genotypen 2 und 3 haben eine günstigere Prognose. Antivirale Medikamente werden für 8 Monate verordnet und ihre Wirksamkeit erreicht 85%.

Laut Statistik sind die HCV 1, 2 und 3 in den meisten Fällen in der Russischen Föderation registriert.

Beim Entschlüsseln eines Labortests kann diese Antwort angezeigt werden - „nicht typisiert“. Dies bedeutet, dass ein Virus im Kreislaufsystem des Patienten zirkuliert und vom Testsystem nicht erkannt werden kann. Das Ergebnis der Analyse zeigt in diesem Fall, dass der Erreger für ein bestimmtes geografisches Gebiet nicht typisch ist.

Wie kann man zuverlässige Ergebnisse erzielen?

Damit eine qualitative Untersuchung der PCR zum Nachweis der RNA des Erregers Hepatitis C die richtigen Ergebnisse zeigte, müssen die Anforderungen für die Vorbereitung auf die Labordiagnostik beachtet werden:

1. Die Blutentnahme erfolgt mit leerem Magen, und die „hungrige“ Lücke sollte nicht weniger als 8 Stunden betragen.
2. Zwei Tage vor der Studie wird empfohlen, keine alkoholischen Getränke mehr zu trinken und keine würzigen, fettigen und geräucherten Speisen zu verwenden.
3. die Einführung von Arzneimitteln, die die Blutgerinnung reduzieren, beispielsweise Heparin, abbrechen. Wenn diese Medikamente aus gesundheitlichen Gründen verschrieben werden, müssen Sie den Arzt informieren. Darüber hinaus sollte der Spezialist über die Zulassung anderer Arzneimittel informiert sein, die das Ergebnis von Laboruntersuchungen beeinflussen können.
4. Am Vorabend der Sammlung von biologischem Material sollten physiotherapeutische Verfahren nicht durchgeführt und schweren körperlichen Anstrengungen ausgesetzt werden.

Die Ergebnisse der Analyse können nicht nur von der Person, die Blut spendet, beeinflusst werden, sondern auch von anderen Faktoren, nämlich:

• schlechte Blutentnahme;
• Nichteinhaltung von Empfehlungen zum Transport von biologischem Material;
• unzureichende Ausbildung der Laboranten;
• Nichteinhaltung der Forschungstechnik;
• Einführung von Antikoagulanzien (Heparin) am Vorabend der Blutentnahme. Diese Gruppe von Medikamenten reduziert die Gerinnung und verlangsamt dadurch die Arbeit der Reagenzien.

In verschiedenen Laboratorien kann die diagnostische Reaktion leicht abweichen, diese Fehler beeinflussen jedoch nicht das Endergebnis der Studie.

Besonderes Augenmerk wird auf die Arten von Testsystemen gelegt, die im Labor verwendet werden. Reagenzien mit hoher Empfindlichkeit werden oft bevorzugt. Dies ist für Patienten mit geringer Viruslast wichtig, da es schwer zu erkennen ist.

Wie oft wird ein Labortest durchgeführt?

Die primäre Polymerase-Kettenreaktion wird bei Menschen durchgeführt, bei denen im Immunoassay Antikörper gegen den Erreger der Hepatitis nachgewiesen wurden. In diesem Fall ist es beauftragt, die Tatsache der Infektion einer Person zu bestätigen und das Stadium der Erkrankung festzustellen. Darüber hinaus erlaubt die Analyse die Bestimmung des Subtyps des Virus, der für die Auswahl der Medikamente besonders wichtig ist.

Der nächste Zeitraum für die obligatorische Laboruntersuchung beträgt 3 Monate ab Beginn der antiviralen Therapie. Diagnostics ermöglicht es, die Wirksamkeit von Medikamenten zu bewerten, die Dosis anzupassen oder sie zu ersetzen.

Zusätzlich zu den Basistests kann die PCR 4 und 24 Wochen nach Behandlungsbeginn zusätzlich durchgeführt werden. Eine positive Prognose der Krankheit wird durch eine Abnahme der Viruslast nach drei Monaten Therapie bestätigt. Zum Beispiel sollte es von 1 Million IE / ml auf mehrere Hunderttausend abnehmen.

Wenn die Konzentration der Erreger im Blut gleich bleibt oder leicht ansteigt, deutet dies auf die Unwirksamkeit antiviraler Mittel hin und erfordert deren Ersetzung. Mit PCR am Ende der Behandlung kann die Genesung des Patienten bestätigt werden.

Um die Ergebnisse der Labordiagnostik richtig interpretieren zu können, ist die Konsultation eines Hepatologen oder Spezialisten für Infektionskrankheiten erforderlich. Aufgrund der hohen Häufigkeit falscher Reaktionen im ELISA wird die Analyse ausschließlich für das Primärscreening verwendet. Für eine genauere Untersuchung des Patienten wurde eine Polymerase-Kettenreaktion verwendet.

Pro-Analyse der PCR für Hepatitis-C-Virus

Hepatitis C ist für jeden Menschen eine schwere Lebererkrankung. Die Pathologie wird durch das Flavivirus HCV verursacht, in dessen Struktur das RNA-Molekül vorliegt, das den allgemeinen genetischen Code des Virus trägt.

Die Pathologie kann verschiedene Formen haben, alles hängt direkt von dem Allgemeinzustand der Person und den Eigenschaften jedes einzelnen Organismus ab.

Diese Struktur ermöglicht es, die PCR auf das Vorhandensein eines Virus der Kategorie Hepatitis C im Körper zu analysieren.

Sie können rechtzeitig ein für den Menschen gefährliches Virus identifizieren, sich einer medikamentösen Behandlung unterziehen, die Gesundheit wiederherstellen und den Körper vor der Zerstörung der Leber schützen.

Das HCV-Virus kann sich sowohl akut als auch chronisch manifestieren. Wenn eine Person zu einer bestimmten Zeit dieses Virus entdeckt hat, muss es der PCR-Analyse zugeordnet werden.

Warum wird die PCR-Analyse durchgeführt?

Basierend auf den Ergebnissen der Analyse kann der Arzt ein Behandlungsschema erstellen.

Die labormedizinische Analyse der PCR für Hepatitis C ist eine Studie mit biologischem Material zur Bestimmung des Flavavirus. Die Studie steht für Polymerase-Kettenreaktion.

Es zeigt den quantitativen Gesamtwert der viralen Läsion, ihre qualitativen Eigenschaften und es ist auch möglich, den Genotyp des Virus zu bestimmen, der RNA enthält.

Es ist wichtig! Auf der Grundlage dieser Analyse bestimmt der Arzt die Methode, die Art der Therapie und ihre Dauer. Durch Analyse kann auch der allgemeine epidemiologische Faktor, dh das Risiko der Übertragung der Krankheit auf andere Träger, bestimmt werden.

Analyse in der modernen Medizin wird auch RNA-Analyse genannt. Der Grund dafür ist, dass das Hepatitis-C-Flavavirus inhärent aus einem RNA-Partikel besteht, dessen Größe etwa 30 bis 60 nm beträgt. Ein charakteristisches Merkmal dieses Virus ist eine gewisse Neigung zur Mutation.

Jede Unterart oder jeder vorhandene Genotyp weist eine Vielzahl von Resistenzen auf. Dieser Umstand wird zur Grundlage für verschiedene Methoden der Erforschung und Behandlung der Krankheit sowie für eine weitere Prognose mit gut durchgeführter Therapie.

Wie geht das?

Die Analyse wird streng auf leeren Magen durchgeführt, dh vor dem Frühstück wird venöses Blut verabreicht. Die Testmethode wird mittels Real-Time-PCR oder hochsensibler, durch moderne Standarddiagnostik, die in Echtzeit durchgeführt wird, durchgeführt.

Die untere Nachweisgrenze beträgt in diesem Fall 15 IE / ml. Die Analyse wird streng unter Verwendung geschlossener automatisierter Systeme durchgeführt. Hepatitis C kann unter Verwendung von Tests wie COBAS AMPLICOR mit einer Gesamtempfindlichkeit von 50-100 IE / ml bestimmt werden.

Es ist wichtig! Alle Arten ähnlicher moderner Laboruntersuchungen werden auf der Grundlage einer bestimmten Empfindlichkeitsschwelle durchgeführt.

Wir sprechen über die Fähigkeit des Reagens, das zum Nachweis des minimalen Niveaus der Fähigkeit des Reagens zur Bestimmung des Virus im untersuchten biologischen Material verwendet wird. Wenn sich keine Krankheit im Körper befindet, sieht das Ergebnis der Studie wie "nicht gefunden" aus.

Das Bild zeigt eine PCR-Analyseschaltung:

Arten der PCR-Analyse und ihre Ergebnisse

Wenn Sie im Bereich Kekse die geringsten Beschwerden und Schmerzen haben, sollten Sie sofort einen Arzt aufsuchen, der eine gründliche Untersuchung durchführt. Die PCR-Analyse für Hepatitis C basiert auf drei Hauptpunkten:

1. Quantitative Analyse.
2. Qualitative Analyse.
3. Genotypisierung

Die durchgeführten Tests bieten die Möglichkeit, die genaue Art der Virämie und verschiedene genetische Plansymptome des Vorhandenseins des Erregers zu bestimmen und zu ermitteln. In direktem Verhältnis zur Sensitivität kann die medizinische Forschung aus dem durchgeführten Diagnosesystem einmalig durchgeführt werden, ebenso wie eine Bestätigung.

Dies sollte zur Verdeutlichung der zuvor erzielten Ergebnisse erfolgen und wird in diesem Fall von einem empfindlicheren Reagenz verwendet.

Hochwertige PCR

Eine qualitative Analyse für die PCR ist eine andere Bezeichnung für eine Studie wie Polymerasekettenreaktion. Bei der Standardempfindlichkeit des Tests, mit der das Vorhandensein einer viralen Mikrobe festgestellt werden kann, liegen die Indikatoren im Bereich von 10 bis 500 IE / ml.

Bei einer negativen Analyse der Krankheit wird die Analyse zeigen, dass die Gesamtkonzentration im Blut des Patienten um eine Größenordnung niedriger als der allgemeine Schwellenwert für die Anfälligkeit für das Diagnosesystem liegt.

Wenn während der Qualitäts-PCR eine Antwort „nicht erkannt“ erhalten wurde, müssen Sie für die nachfolgende Behandlung die Gesamtempfindlichkeitsschwelle des Reagenz kennen. Die positive Reaktion kann während der PCR-Analyse bereits am 4. Tag nach der Infektion erhalten werden. Standardproteinfraktionen zu etablierten Flavaviren können später erscheinen.

Das allgemeine Schema der PCR-Analysen kann wie folgt dargestellt werden:

Quantitative PCR

Quantitative PCR ist ein spezieller Indikator für die erzeugte Viruslast und spiegelt die Gesamtkonzentration der Virus-RNA im menschlichen Körper wider. Dieser Indikator zeigt die Menge an viralen RNA-Enzymen, die pro Kubikzentimeter aus der Blutvene vorhanden ist.

Die Ergebnisse dieser Studie im System der medizinischen Forschung werden in Einheiten von einem Milliliter angegeben. Bei in den Händen ausgestellten Zertifikaten kann dieser Indikator wie 1,7 Millionen oder 1,700.000 IE / ml aussehen.

Die quantitative PCR-Analyse wird diesen Patienten zugewiesen, bevor eine antivirale Therapie durchgeführt wird. Das zweite Mal findet in der 12. Behandlungswoche statt, sodass Sie die Ergebnisse der Therapie mit Hepatitis C richtig einschätzen können. Mit anderen Worten, die Analyse ermöglicht die Bestimmung der folgenden wichtigen Parameter:

1. Die Infektiosität, dh das Risiko der Übertragung von Mikroben von einer infizierten Person auf eine gesunde Person, wird bestimmt. Je höher die Konzentration der Flavavirus-RNA ist, desto höher ist die Wahrscheinlichkeit einer Infektion einer anderen Person, was für die sexuellen Beziehungen wichtig ist.
2. Der allgemeine Wirkungsgrad und die gewählte Behandlung.
3. Dies ist eine ideale Gelegenheit, um die Dauer und Prognose einer antiviralen Therapie zu bestimmen. Je höher die Belastung, desto länger dauert die Behandlung.

Es ist wichtig zu wissen, dass die quantitative PCR von der Art des Labortests und der Empfindlichkeitsschwelle abhängt. Die niedrigste Grenze des etablierten Standards ist der Indikator, der nicht 600.000 IE / ml erreicht.

Der Durchschnitt liegt im Bereich von 600.000 bis 700.000 IE / ml. Wenn Ergebnisse über 800.000 IE / ml erzielt wurden, bestimmt der Arzt sofort eine hohe Konzentration einer Substanz wie RNA mit einem in der Zusammensetzung vorhandenen Virus.

Es ist wichtig! Die direkte Beziehung zwischen dem HCV-RNA-Level und dem Schweregrad der Erkrankung legt nahe, dass dieses Virus in der allgemeinen Blutzusammensetzung vorhanden ist, und weist auch auf die Komplexität der Pathologie hin. Der Patient kann eine ausreichend hohe Viruslast haben. Außerdem zeigt diese Beziehung, dass die Zellen ziemlich ernsthaft geschädigt sind.

Genotypisierung

Aufgrund der relativ hohen Mutationsaktivität von HCV in der Natur kann im Verlauf der durchgeführten Tests festgestellt werden, wie der Virustyp im Blut eines Kranken vorhanden ist. In der modernen Medizin sind 11 Genotypen eines Virus wie Hepatitis C bekannt, das eine ziemlich große Anzahl verschiedener Unterarten oder Subtypen umfasst.

Die Typen 1, 2 und 3 sind in Russland bekannt und üblich und generell ist die Genotypisierung ein sehr wichtiges Element der durchgeführten Analyse. Damit versteht der Arzt den Grad der Resistenz oder Resistenz der Pathologie gegenüber den ausgewählten Medikamenten.

Auf der Grundlage dieser Analyse wird fast immer eine zukünftige Behandlung aufgebaut. Dies ist wichtig, weil es Behandlungsregeln gibt wie:

Qualitative Analyse für Hepatitis C

8. März 2017, 12:29 Fachartikel: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

Eine qualitative Analyse der Polymerase-Kettenreaktion - PCR für Hepatitis C bestimmt das Vorhandensein oder Fehlen von HCV im Körper. Unter Laborbedingungen wird die Struktur der RNA untersucht, zu der auch das Virus gehört. Im Falle des Nachweises des Virus C ist eine Behandlung erforderlich, da der vernachlässigte Zustand der Leber schwerwiegende Folgen haben kann. Nach der Erholung wird eine qualitativ hochwertige PCR durchgeführt, um das Fehlen von Antikörpern zu bestätigen. Bestellt und zur Routineinspektion. Bei einer geringen Konzentration des Erregers im Blut kann die PCR (qualitativ) möglicherweise nichts erkennen, da das Diagnosesystem eigene Empfindlichkeitsschwellen aufweist. Im Anfangsstadium der Erkrankung oder bei milder Form wird die PCR durch ultradiagnostische Untersuchungen an extrem empfindlichen Geräten durchgeführt.

Was ist RNA-Virus?

Der Begriff RNA des Hepatitis-C-Virus (oder Hepatitis-C-Virus-RNA) ist die Lebererkrankung selbst. Virus C bindet an die gesunde Körperzelle, indem es in das Innere eindringt. Im Laufe der Zeit, im ganzen Körper verteilt, ist es nur notwendig, ins Blut zu gelangen. Infolgedessen dringt der Erreger in die Leber ein, verschmilzt mit seinen Zellen und arbeitet hart. Leberzellen (Hepatozyten) arbeiten unter ihrem Einfluss, verändern sich und sterben ab. Je länger sich das Virus C in der Leber befindet, desto mehr sterben die Zellen ab. Im Laufe der Zeit entwickeln sich gefährliche Krankheiten, die zu bösartiger Degeneration und zum Tod führen.

Eine Infektion der Leber mit dieser Art von Virus kann sich äußerlich nicht äußern. Eine infizierte Person fühlt sich seit vielen Jahren oder Jahrzehnten vollkommen gesund, und nur eine zufällige Untersuchung zeigt meist die Pathologie. Beim Spenden von Blut für Hepatitis wird ein Teil der RNA-Kette (Ribonukleinsäure) untersucht, die Teil des menschlichen Gens (DNA) ist. Die Ergebnisse von Labortests sollten nicht zur Selbstbehandlung verwendet werden, da dies nur ein Indikator ist. Das genaue Bild und die weitere Diagnose werden vom Arzt besser bestimmt.

Wenn fertig: Hinweise für die Forschung

Zur Bestätigung von HCV wird eine PCR-Analyse durchgeführt (Polymerasekettenreaktion). PCR-Studien helfen, den Erreger in der RNA-Struktur zu finden und eine wirksame Therapie vorzuschreiben. In folgenden Fällen ernannt:

• Erkennung von Anzeichen einer Leberentzündung;
• Vorsorgeuntersuchungen;
• Untersuchung von Kontaktpersonen;
• Diagnose von Hepatitis gemischten Ursprungs (Bestimmung des Haupterregers);
• Bestimmen des Ausmaßes der Reproduktionsaktivität des Virus in der chronischen Form;
• Leberzirrhose;
• um die Wirksamkeit der verordneten Behandlung zu bestimmen.

Forschungs-PCR verschreibt einen Arzt, um die Wirksamkeit der Behandlung von Hepatitis zu bestimmen.

Es gibt sowohl eine qualitative als auch eine quantitative Analyse der PCR. Quantitative PCR zeigt den prozentualen Anteil von RNA mit Virusträgern im Blut, und qualitativ zeigt das Vorhandensein oder Fehlen von Viren. Ein positiver Qualitätsindikator (Vorhandensein von Hepatitis-C-RNA) erfordert auch quantitative Forschung. Eine hohe Konzentration des Erregers der Hepatitis C ist mit dem Risiko der Übertragung, dh Infektion anderer, verbunden. Niedrige Zahlen lassen sich besser behandeln. Die Menge an RNA-Viren im Blut hängt nicht von der Intensität der Erkrankung ab. Die PCR-Analyse wird auch bei der Interferontherapie durchgeführt, um die Dauer und Komplexität des Behandlungsverlaufs vorzugeben.

Merkmale der qualitativ hochwertigen PCR-Analyse bei Hepatitis C

Bei allen Patienten, die Antikörper gegen Hepatitis C im Blut haben, wird eine qualitative Analyse mit einem Indikator für die Polymerase-Kettenreaktion zugeordnet. Es wird empfohlen, eine Analyse für Hepatitis B und dann bei positivem Ergebnis und für Hepatitis D durchzuführen. Außerdem sollte eine qualitativ analysierte Reaktion in Verbindung mit anderen Blutuntersuchungen durchgeführt werden. Analysen zeigen ein vollständiges Bild der Ausbreitung von Viren.

Von den Testergebnissen ist nur ein positiver Test auf Hepatitis C sichtbar oder negativ, dh das Vorhandensein oder Fehlen eines Virus. Wenn die Ausgabe "erkannt" wird, ist und bleibt der Virus aktiv. Die Bezeichnung "nicht erkannt" weist auf das Fehlen eines Virus oder dessen geringe Menge hin. Bei diesem Indikator ist zu berücksichtigen, dass die analytische Empfindlichkeit von Diagnosesystemen unterschiedlich ist und RNA-Hepatitis C möglicherweise noch im Blut ist, sich aber in der Analyse nicht manifestiert.

Eine besonders empfindliche PCR-Methode zeigt Ultrahepatitis C auch in mageren Mengen. Eine Fluoreszenz-Hybridisierungsstudie wird verwendet, die um ein Vielfaches höher ist als bei Standard-PCR-Systemen. Die Methode wird in mehreren Fällen verwendet:

• vermutete versteckte Formen von Hepatitis C;
• Die PCR-Diagnostik bestätigte den Erreger nicht, es gibt jedoch Antikörper.
• im Falle einer Genesung;
• frühe Infektion zu erkennen.

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Dekodierungsanalyse

Die PCR-Dekodierung von HCV beeinflusst die endgültige Entscheidung insbesondere bei der Diagnose mit der Ultrametod-Methode. Der Hauptnachteil dieser Studie ist die strikte Einhaltung der Sterilbedingungen für Probe und Material. Eine geringfügige Abweichung zeigt manchmal ungenaue analytische Schlussfolgerungen und erschwert die Diagnose und die nachfolgende Behandlung. Die Analyse der PCR zur Bestimmung von Hepatitis-RNA zeigt nicht immer sicher ein Bild der Krankheit, manchmal sind Ungenauigkeiten erlaubt und in beide Richtungen.

Bei der Diagnose des Hepatitis-Virus wird eine umfassende Untersuchung empfohlen.

Norm der Indikatoren

Das Fehlen von JgM-Antikörpern gegen Virushepatitis C in den Ergebnissen der Studie gilt als Norm bei der Analyse der Polymerase-Kettenreaktion. Gleichzeitig deuten die Ergebnisse der serologischen Analyse auf das Vorhandensein von Antikörpern gegen das Virus C hin, und dies liegt ebenfalls im normalen Bereich. Eine qualitative Definition zeigt nicht die Intensität der Erkrankung, sondern nur den Erreger der Hepatitis C in der RNA. Diese Analyse wird nach der Behandlung wiederholt, um die tatsächliche Erholung zu bestätigen.

Abweichungen

Wenn JgM-Antikörper gegen HCV-RNA vorliegen, deutet dies auf eine sich entwickelnde Infektion hin. Die Krankheit verläuft gleichzeitig akut oder chronisch und manifestiert sich in verschiedenen Stadien. Wenn eine Abnahme der Anzahl der Antikörper festgestellt wird, zeigt die Analyse an, dass die Ergebnisse der Behandlung während der Genesung erzielt wurden. Es gibt äußerst seltene Fälle von falsch positiven Befunden in der Diagnostik. Sie werden bei Frauen während der Schwangerschaft und bei Menschen mit anderen Infektionskrankheiten gefunden.

PCR-Analyse für Hepatitis C

Die Diagnose "chronische Virushepatitis C (CVHS)" erfordert eine umfassende Untersuchung der Person, einschließlich klinischer, Labor- und Instrumentenstudien. Aus diagnostischer Sicht für die korrekte Diagnose wichtig ist die PCR-Methode - Polymerase-Kettenreaktion.

Was zeigt diese Analyse und warum wird sie benötigt?

Diese Labormethode erkennt RNA des Hepatitis-C-Virus im menschlichen Blut. Zusammen mit dem ELISA-Test (ELISA) für Antikörper gegen das Virus wird die PCR zur Diagnose von CVHC und dessen Erregergenotyp verwendet. Diese Forschung ist eine der neuesten Methoden der Labordiagnostik. Die Zuverlässigkeit bei CVHS liegt bei über 97%, was als sehr guter Indikator für die Forschung gilt.

Es gibt drei PCR-Bluttests für CVHS: qualitative, quantitative und Virusgenotypisierung. Die erste Studie (qualitative Analyse) des Virus erkennt es im Blut und wird daher nur zur Diagnose verwendet.

Die zweite (quantitative) Studie bestimmt den Grad der Viruslast des Körpers und wird daher zur Überwachung der Wirksamkeit der Therapie verwendet.

Die dritte PCR (Genotypisierung) klärt die Diagnose und legt den Genotyp des Virus fest, was für die Ernennung einer korrekten antiviralen Behandlung sehr wichtig ist.

Die Essenz der Polymerase-Kettenreaktionstechnik besteht in der Verwendung von Enzymen, die das genetische Material des Erregers im Biomaterial vervielfachen. Bei diesem Vorgang wird das Röhrchen mit Blut mehrmals erhitzt und auf die zur Beschleunigung der enzymatischen Reaktion erforderliche Temperatur abgekühlt. Infolge dieser Manipulationen steigt die Menge des viralen Genoms um ein Vielfaches an, so dass es auch mit einer minimalen Menge nachgewiesen werden kann.

Die PCR-Diagnostik hat viele Vorteile gegenüber anderen Labortests:

• hohe Empfindlichkeit - 97-98%;
• garantierte analytische Spezifität (deckt genau den Erreger auf, den Sie finden möchten, und nicht den verwandten Stamm);
• Dirigiergeschwindigkeit (es dauert nicht länger als 2 Tage, um eine Schlussfolgerung zu ziehen).

Drei Arten von PCR-Assays

Qualitativ hochwertige PCR-Analysen werden allen Patienten zugeordnet, bei denen ELISA Antikörper gegen das HVGS-Virus nachgewiesen hat. Nach der Durchführung einer qualitativ hochwertigen PCR können zwei Antwortmöglichkeiten erhalten werden: "RNA detektiert" oder "RNA wird nicht detektiert". Um die minimale Virusmenge im Blut zu ermitteln, sind Testsysteme mit einer Empfindlichkeit von mindestens 50 IE / ml erforderlich. Wenn die Konzentration des Virus im Blut des Patienten geringer ist, als das diagnostum bestimmen kann, kann das Ergebnis der Studie falsch negativ sein. Um einen solchen Diagnosefehler zu vermeiden, sollten Laboratorien, die PCR-Diagnosen durchführen, mit hochempfindlichen Testsystemen ausgestattet werden. Im Labor "Invitro" werden beispielsweise Tests mit einer Empfindlichkeit von 15 IE / ml verwendet. Laboranten sind verpflichtet, Patienten und Ärzten auf erstes Ersuchen Auskunft über die Empfindlichkeit der Tests zu geben.

Die quantitative Analyse der PCR bestimmt den Grad der Virämie, dh die Konzentration des Erregers im Blut, die Viruslast. Das Ergebnis dieser Studie wird im Gegensatz zur qualitativ hochwertigen PCR in Zahlen ausgedrückt, zum Beispiel 2 × 10 * 6 IE / ml, was 2 Millionen internationale Einheiten in 1 ml Blut bedeutet. Einige Laboratorien verwenden einen anderen Indikator - die Anzahl der Kopien / ml. Diese beiden Indikatoren sind leicht umzuwandeln: 1 internationale Einheit entspricht 4 RNA-Kopien. Somit bedeuten 2 × 10 × 6 IE / ml, dass 8 × 10 × 6 Kopien von viraler RNA in 1 ml, d.h. 8 Millionen Exemplare in 1 ml Blut.

Genotypisierung ist die Definition eines der sechs Genotypen eines Virus. Das klinische Bild, die Rate der Entwicklung von Leberkomplikationen und die Prognose für das zukünftige Leben des Patienten hängen vom Genotyp des Erregers ab. Der Genotyp des Virus ist bereits im Stadium der Diagnose von großer Bedeutung, da die Kombination der Arzneimittel und die Dauer des dem Patienten zuzuweisenden therapeutischen Verlaufs von seiner korrekten Bestimmung abhängen.

Aber auch diese scheinbar "perfekte" Laborforschung hat ihre Schattenseiten:

• Die Studie repliziert das genetische Material aller Erreger, auch nicht lebender, die das Ergebnis verfälschen können. Um die Wirksamkeit mit Hilfe der PCR zu überwachen, wird daher eine erneute Analyse nicht früher als zwei Monate nach dem vorherigen durchgeführt, so dass die toten Viren den Organismus des Patienten "verlassen" können;
• Ein Teil des viralen Genoms, der mit Testsystemen bestimmt wird, kann theoretisch in anderen Viren oder Mikroorganismen vorhanden sein, so dass die Möglichkeit einer falsch positiven Antwort besteht.
• Viren mutieren schnell. Manchmal sind Geschwindigkeit und Ausmaß der Virusmutation so hoch, dass das Testsystem aufhört, ihr Genom zu erfassen. Als Ergebnis ist ein falsch negatives Ergebnis möglich.

Um diese Mängel zu beheben, führen Hersteller von Labortestsystemen für die PCR-Diagnostik ständig Tests durch, einschließlich Kreuzreaktionen und Empfindlichkeit gegenüber einem bestimmten Genotyp des Virus.

Wie mache ich einen PCR-Test für Hepatitis C?

Damit der Abschluss einer PCR-Untersuchung zuverlässig ist, müssen die Regeln für die Vorbereitung strikt eingehalten werden:

• Die Studie wird mit leerem Magen durchgeführt (Glukose, Fette, Mineralien, die aus der Nahrung in das Blut gelangen, können die Geschwindigkeit und die Qualität der Enzymreaktion beeinflussen).
• Die Lücke zwischen der letzten Mahlzeit und der Blutentnahme zur Analyse sollte mindestens 8 Stunden betragen.
• Am Vorabend der Studie ist es verboten, Alkohol zu sich zu nehmen und fetthaltige Nahrungsmittel zu sich zu nehmen, deren Ausschluss länger dauert.
• einen Tag vor dem Besuch des Labors sollte starker physischer und emotionaler Stress vermieden werden
• Bis zum Zeitpunkt der Blutentnahme wird das Rauchen nicht empfohlen.

Um das Auftreten falscher Schlussfolgerungen zu vermeiden, muss der mutmaßliche Patient etwas früher ins Labor kommen, als Blut abgenommen wird. Es dauert 15-20 Minuten, bis eine Person zu Atem kommt und sich beruhigt. Adrenalin, das nach einem kurzen Spaziergang im Blut vorhanden ist, kann das Untersuchungsergebnis beeinflussen.

Wenn der zur Analyse übermittelte Patient irgendwelche Medikamente einnimmt, sollte er dies dem Arzt mitteilen. Möglicherweise müssen einige von ihnen für einige Zeit abgelehnt werden (wenn möglich).

Das Ergebnis der Analyse der PCR auf Hepatitis C

Entschlüsselung der Ergebnisse des Laborarztes des Labors, der die Analyse durchgeführt hat. Decodierung ist die Bestimmung der Abweichung des Ergebnisses von der Norm. Die Indikatorrate wird direkt vom Hersteller des Testsystems festgelegt, das vom Labor für die Diagnose verwendet wird. Daher überrascht es nicht, dass in einigen Laboratorien die Viruslast in IE / ml und in anderen in Kopien / ml bestimmt wird.

Nach Erhalt der Schlussfolgerung ist es notwendig, sie richtig interpretieren zu können. Die Behandlung der Ergebnisse der Studie sollte vom behandelnden Arzt des Patienten mit Hepatitis C durchgeführt werden. Erst nach einer objektiven, instrumentellen und Laboruntersuchung des Patienten kann der Arzt eine ausreichende Datenmenge für die korrekte Interpretation der erhaltenen PCR-Ergebnisse erhalten.

Die Auswertung der qualitativen Analyse bereitet in der Regel auch bei Patienten keine Schwierigkeiten. Das Ergebnis kann nur eins sein: "erkannt" oder "nicht erkannt". In diesem Fall ist der zweite die Norm.

Indikatoren für die quantitative Analyse sind schwieriger zu interpretieren. Es zeigt den Grad der Viruslast des Patienten. Selbst unter Hepatologen besteht kein Konsens darüber, wie die erkannte Virämie behandelt werden soll. Die meisten Ärzte neigen zu der Annahme, dass eine hohe Belastung von mehr als 8 × 10 × 5 IE / ml in Betracht gezogen werden sollte. Eine Beladung von mehr als 1 × 10 × 7 IE / ml wird als sehr hoch angesehen, während eine geringe Beladung weniger als 4 × 10 × 5 IE / ml beträgt.

Der Grad der Viruslast deutet auf Virulenz (Aggressivität) des Virus hin: Je höher die Menge im Blut, desto schneller können sich Komplikationen der Leber entwickeln. Eine hohe Konzentration des Virus im Blut einer schwangeren Frau erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass es durch die Hämato-Plazenta-Barriere in den Fetus eindringt. Virämie beeinflusst auch die Wirksamkeit der Behandlung: Bei niedrigen Zahlen ist die Wirksamkeit der Therapie höher als bei hohen.

Um auf die Genauigkeit der PCR-Analyse für Hepatitis C zu vertrauen, müssen nur diejenigen Laboratorien bevorzugt werden, die sich bewährt haben. Die Preispolitik sollte in diesem Fall keine primäre Rolle spielen.

Verwendung der PCR-Diagnostik

Die Polymerase-Kettenreaktion (PCR) in der Molekularbiologie ist eine experimentelle Methode zum Nachweis von Viren. Damit können Sie die Konzentration bestimmter Nukleinsäurefragmente (DNA) in Proben von biologischem Material deutlich erhöhen, wodurch sie bestimmt (erkannt) und gezählt werden können.

Die Analyse wird wie folgt durchgeführt. Genetisches Material (eine Blutprobe), das möglicherweise das gewünschte Gen enthalten kann, wird in die Röhre eingeführt. Es werden auch Primer platziert - chemisch synthetisierte Segmente einer kleinen Länge des gewünschten Gens.

Dem Gefäß wird auch DNA- oder RNA-Polymerase zugesetzt, die in der Lage ist, eine Nukleinsäurekette anzuordnen, die völlig identisch mit dem Original ist. Die resultierende Zusammensetzung wird injiziert und ein Satz von vier freien Nukleotiden - ein spezielles Baumaterial für RNA oder DNA, von denen eines radioaktive Phosphorpartikel enthält.

Die resultierende Mischung wird auf 95–96 ° C erhitzt, weshalb zwei normalerweise miteinander verflochtene DNA-Helices gewebt werden. Dann wird der Wirkstoff abgekühlt, zu welchem ​​Zeitpunkt die Primer selbst an die gewünschte Region des viralen Genoms anhaften, wodurch verhindert wird, dass RNA (oder DNA) die Doppelhelix erneut bildet.

Beim Abkühlen sucht die Polymerase nach einer freien Nukleotidkette. Für das Funktionieren dieses Enzyms wird eine einzelne Nukleotidkette benötigt. Da die Polymerase (wie ein Ring an einem Seil) entlang der DNA-Kette rutscht, kann sie nicht an einer Doppelhelix arbeiten.

Danach wird ein wiederholter Erwärmungszyklus durchgeführt, aufgrund dessen Ketten von Nukleotiden getrennt werden. Bei jedem dieser PCR-Zyklen steigt die Menge des gewünschten Hepatitis-Gens in der Probe exponentiell an, und der Rest des genetischen Materials wird linear produziert (wächst).

Nach der Reinigung der Lösung von Nukleotidresten und der Trennung durch Elektrophorese von DNA-Ketten durch den Molekulargewichtsparameter kann leicht festgestellt werden, ob sich in der untersuchten Probe ein gewünschtes Gen befindet oder nicht.

Vorteile der PCR

Durch Labortests mittels PCR können noch mehr Informationen erhalten werden als das Vorhandensein der Virus-RNA. Durch die Bestimmung des Parameters der radioaktiven Strahlung kann festgestellt werden, wie viel genetisches Material ursprünglich in der untersuchten Probe enthalten war. Bei Hepatitis den Indikator für die Viruslast bestimmen.

Ein weiterer Vorteil dieser Methode ist die sehr hohe Empfindlichkeit der CR-Reaktion. Es ist viel höher als bei den klassischen Methoden zum Erkennen von Viren. Idealerweise reicht für die Identifizierung des gewünschten Gens für die PCR nur ein Virus in der Probe aus.

Darüber hinaus ist die PCR völlig spezifisch. Seine Primer sind so konzipiert, dass sie vollständig den eindeutigen Regionen der gewünschten Gene entsprechen, die keine andere Sequenz hat. Da Fingerabdrücke einzigartig sind, verfügt jedes Gen über einzigartige Nukleotidsequenzen.

Qualitative Analyse der PCR

Qualitative Analysen zeigen nur das Vorhandensein des Virus im Blut. Dieser Test sollte für alle Patienten durchgeführt werden, bei denen Antikörper gegen Hepatitis C im Blut gefunden wurden, und kann nur einen von zwei Werten ergeben: „erkannt“ oder „nicht erkannt“. Bei einem gesunden Menschen sollte die Norm (Referenzwert) „nicht erkannt“ werden.

Es gibt eine spezielle Interpretation solcher Ergebnisse der qualitativen Forschung:

• Das Ergebnis wird "erkannt". Dies bedeutet, dass in der analysierten Probe des entnommenen biologischen Materials ein für das Hepatitis-C-Virus spezifisches RNA-Fragment gefunden wurde, und es besteht eine Tatsache, dass der Patient mit dem Hepatitis-C-Virus infiziert ist. und zu diesem Zeitpunkt infiziert es neue Leberzellen im Körper.
• Das Ergebnis wird "nicht erkannt". Ein solches Urteil zeigt, dass in der untersuchten Probe des erhaltenen biologischen Materials in diesem Labor kein für das Hepatitis-C-Virus spezifisches RNA-Fragment gefunden wurde. Alternativ lag die Konzentration der RNA der Erregerinfektion in dieser Probe unterhalb der Sensitivitätsgrenze des Tests.

In der akuten Phase der Hepatitis-C-Virus-RNA können solche qualitativen Studien mit der PCR-Methode bereits nach 1 bis 2 Wochen unmittelbar nach der Infektion des Körpers, dh lange vor dem Auftreten von Antikörpern gegen Hepatitis selbst, nachgewiesen werden.

Unzuverlässige Testergebnisse dieser Studie können erhalten werden durch:

• kontaminiertes Biomaterial;
• das Vorhandensein von Heparin im Blut des Patienten;
• das Vorhandensein von chemischen Substanzen oder Proteinsubstanzen (Inhibitoren) in der Probe, die die verschiedenen Komponenten der PCR beeinflussen.

Um eine qualitative Analyse der PCR durchzuführen, ist keine besondere Vorbereitung des Patienten für die Studie erforderlich. Das verwendete Material ist venöses Blut.

Auswertung der Ergebnisse

Qualitativ hochwertige PCR-Tests haben eine gewisse Empfindlichkeit und können je nach Genauigkeit der Forschung und Ausstattung der Laborausstattung zwischen 10 und 500 IE / ml variieren.

Das bedeutet, wenn das Virus in der Blutprobe in einer sehr niedrigen Konzentration vorliegt (unter dem Schwellenwert für die Empfindlichkeit dieses Labors), kann das Ergebnis für den kranken Patienten "nicht erkannt" werden. Aus diesem Grund ist es bei der Durchführung einer qualitativen Analyse der PCR mit niedrigem Virämiepegel (niedrige Virenkonzentration) beispielsweise für Patienten, die sich einer antiviralen Therapie unterziehen, sehr wichtig, die Sensitivitätsschwelle dieses Diagnosesystems zu kennen.

Varianten von Diagnosesystemen

Zur Kontrolle der virologischen Reaktion wird empfohlen, bei der antiviralen Behandlung Diagnosesysteme mit einer Empfindlichkeitsschwelle von mindestens 50 IE / ml zu verwenden. Diese Kriterien werden zum Beispiel mit Cobas Ampicolor HCV-Test-Analysegeräten (mit einer Genauigkeit von 50 IE / ml) sowie mit RealBest-HCV-RNA (mit einer Empfindlichkeit von 15 IE / ml) erfüllt.

Nach den Empfehlungen der WHO ist es zur Feststellung einer endgültigen Diagnose von Hepatitis C erforderlich, nur auf der Grundlage des dreifachen Nachweises von C-Virus-RNA in den Serumproben eines Patienten zu stützen, wenn keine anderen Hepatitis-Marker-Sorten vorhanden sind.

Neben den PCR-Verfahren wird auch ein TMA-Assay (Transkriptionsamplifikationsverfahren) zum Nachweis von HCV-RNA bei Patienten eingesetzt. Es hat die beste Empfindlichkeitsschwelle (5–10 IE / ml), aber in unserem Land ist eine solche Testmethode noch nicht sehr verbreitet.

Der Bereich der erkannten Virusänderungen

Eine solche qualitative Bestimmung der Anwesenheit von Hepatitis-C-Virus-RNA im Serum ermöglicht die Bestimmung mehrerer Genotypen dieses Virus. Derzeit kennt die Wissenschaft mehr als sechs Genotypen dieses Virus sowie etwa 10 Subtypen dieser Krankheit.

In unserem Land häufen sich Viren 1, 2, 3 Genotypen. Laboratorien können die folgenden Genotypen nachweisen: 1a und 1b, 2a, 2b und 2c sowie 3, 4, 5a und 6, unabhängig von den Subtypen. Für alle Virusmodifikationen beträgt die Erkennungsspezifität 100%.

PCR Quantitative Analyse

Mittels eines quantitativen PCR-Tests wird die Konzentration des Hepatitis-Virus in Blutproben bestimmt (Viruslast). Mit diesem Test auf Virämie (Viruskonzentration) können Sie die Anzahl der Einheiten eines bestimmten genetischen Materials (der viralen RNA selbst) bestimmen, die in einer bestimmten Menge nachgewiesen wird. Bestimmen Sie in diesem Fall die Konzentration in 1 ml, was 1 cu entspricht. sehen

Die quantitativen Parameter der Analyse werden in Zahlen ausgedrückt. Zu diesem Zweck werden internationale Einheiten (IU) pro Milliliter (ml), die als IU / ml bezeichnet werden, als Maßeinheiten verwendet. In einigen Laboratorien kann nun die Virusmenge in anderen Einheiten bestimmt werden: Die Anzahl der Kopien pro ml wird als Kopien / ml angegeben.

• Termine: Bei Hepatitis C erfolgt eine solche quantitative Analyse der PCR unmittelbar vor Therapiebeginn. Dann in der 1., 4., 12. und 24. Woche. Die Bewertung in der 12. Woche ist indikativ und ermöglicht die Bestimmung der Wirksamkeit der Therapie.
• Vorbereitung für die Analyse. Für die quantitative Analyse der PCR ist keine besondere Vorbereitung des Patienten für die Studie erforderlich. Eine halbe Stunde vor der Probenahme darf nicht geraucht werden. Venöses Blut wird als Labormaterial verwendet.

Auswertung der Ergebnisse

Für verschiedene Labortestsysteme gibt es für diesen Indikator unterschiedliche Umrechnungsfaktoren in IE / ml. Im Durchschnitt nehmen sie den Umrechnungsparameter an, bei dem 4 Kopien / ml = 1 IE / ml sind. Das heißt, wenn das Labor beispielsweise das Ergebnis der PCR-Analyse mit 2,4 * 10 6 Kopien / ml liefert, sollte dieser Parameter in 4 unterteilt werden, und wir erhalten 6 * 10 5 IE / ml.

Eine Beladung von 800.000 IE / ml wird als hoch angesehen, was ungefähr 3.000.000 Kopien / ml entspricht. Niedrige Virämie entspricht laut einigen Autoren den Parametern der quantitativen PCR unter 400.000 IE / ml.

Als Ergebnis des quantitativen Tests können die Endergebnisse nicht in Form eines digitalen Werts geliefert werden, sondern: „unter dem Messbereich“ oder „nicht erfasst“.

• Bewertung: "unterhalb des Messbereichs." Dies deutet darauf hin, dass der quantitative Test keine Hepatitis-C-Virus-RNA nachweisen konnte. Das Virus selbst ist jedoch in sehr geringen Konzentrationen im Körper vorhanden. Dies wird durch den zusätzlichen Qualitätstest belegt, der das Vorhandensein des Virus bestätigt.
• Bewertung: nicht erkannt Dieses Ergebnis zeigt an, dass der quantitative Test nicht im Proben-RNA-Virus gefunden wurde.

Der Parameter der Viruslast bestimmt vor allem den Infektionsgrad der Erkrankung, den Grad der "Infektiosität" des Patienten. Je höher die Virenkonzentration des Patienten ist, desto größer ist die Wahrscheinlichkeit, dass er an andere Personen weitergegeben wird. Zum Beispiel beim Geschlechtsverkehr mit einer kranken Person oder vertikal. Dieser quantitative Indikator hilft auch, die Wirksamkeit der Behandlung des Patienten zu bestimmen.

Die Durchführung einer quantitativen Analyse der CCP ist wichtig für die antivirale Therapie, die Beurteilung des Erfolgs und die Planung der Dauer des Kurses. Bei einer schnellen Reaktion des Körpers auf die Behandlung und einem geringen Grad an Virämie kann daher die Therapiedauer verkürzt werden.

Wenn der quantitative PCR-Parameter langsam reduziert wird, sollte die antivirale Therapie verlängert oder modifiziert werden. Wenn die Viruslast niedrig ist, ist dies ein günstiger Faktor für die Therapie, bei erhöhtem Wert ist die angewandte Methode unwirksam, und die Medikamente oder Methoden zu ihrer Anwendung sollten geändert werden.

Qualitative und quantitative Analyse der PCR für Hepatitis C: negativ, positiv, Transkript

Hepatitis C ist eine virale Lebererkrankung, die durch das Flavivirus-HCV (vom englischen Hepatitis-C-Virus) verursacht wird, dessen Struktur ein Ribonukleinsäuremolekül (RNA) enthält. RNA trägt den genetischen Code des Virus. Seine Anwesenheit erlaubt die Analyse der PCR auf Hepatitis C.

Die HCV-Gefahr für eine Person besteht darin, dass das sogenannte serologische Fenster (die Zeit zwischen der Infektion und dem Auftreten einer Reaktion des Immunsystems) recht lang sein kann - von mehreren Wochen bis zu sechs Monaten.

Es erkennt keine Infektion und beginnt rechtzeitig mit der Behandlung.

Abhängig von den individuellen Merkmalen des Organismus kann sich der Träger von HCV in einer akuten Form manifestieren sowie als chronische Erkrankung auftreten, die eine lange und kostspielige Behandlung erfordert. Beim Nachweis von Antikörpern gegen HCV werden eine Reihe von Labortests durchgeführt, einschließlich der PCR gegen Hepatitis C. Dieser Test wird an alle Personen durchgeführt, bei denen Blutantikörper gegen HCV gefunden wurden.

Was ist PCR-Analyse?

Laboranalyse der PCR für Hepatitis C - eine Studie mit biologischem Material zur Identifizierung des Vorhandenseins von Flavavirus.

Die Polymerase-Kettenreaktion (so wie die Abkürzung steht) zeigt den quantitativen Wert der viralen Schädigung des Körpers, seine qualitativen Merkmale sowie den Genotyp des RNA-haltigen Virus.

Auf ihrer Basis sowie auf Basis zusätzlicher Analysen wird die Art und Dauer der Therapie sowie der epidemiologische Faktor (der Grad der Übertragung auf einen anderen Träger) bestimmt.

Was ist Hepatitis-C-RNA-Analyse?

Hepatitis-C-PCR wird auch als RNA-Analyse (HCV-RNA) bezeichnet, weil Das Flavavirus enthält ein RNA-Partikel mit einer Viriongröße von 30 bis 60 nm. Ein Merkmal dieses Mikroorganismus ist die hohe Neigung zu Mutationen.

Jede der Unterarten (Genotypen) des Virus hat eine unterschiedliche Resistenz, was zu unterschiedlichen Behandlungsmethoden und der Art der weiteren Prognose für den Patienten führt.

Biologisches Material (venöses Blut) wird auf leeren Magen abgegeben und in der Regel mit der Real-Time-PCR-Methode (hochempfindliche Echtzeitdiagnostik mit einer unteren Nachweisgrenze von 15 IE / ml unter Verwendung geschlossener automatisierter Systeme) getestet.

Es gibt andere Tests, beispielsweise COBAS AMPLICOR mit einer Empfindlichkeit von 50-100 IE / ml. Für jeden Labortest ist die Empfindlichkeitsschwelle wichtig, d. H. die Fähigkeit des Reagens, die minimale Viruskonzentration in biologischem Material nachzuweisen.

Arten der Analyse von Hepatitis C durch PCR

Hepatitis-C-PCR umfasst drei wichtige Komponenten:

• qualitative Analyse;
• quantitative Analyse;
• Genotypisierung.

Diese Tests können die Art der Virämie sowie die genetischen Merkmale des Erregers bestimmen. Abhängig von der Empfindlichkeit des Diagnosesystems wird die Studie einmal durchgeführt, und manchmal wird ein zweiter Test mit einem empfindlicheren Reagenz durchgeführt, um die Ergebnisse zu bestätigen oder zu verfeinern.

Hochwertige PCR-Hepatitis C

Hepatitis-C-PCR-Analyse ist eine weitere häufige Bezeichnung für die Analyse der Polymerase-Kettenreaktion. Die Standardempfindlichkeit des Tests, mit der das Vorhandensein viraler Läsionen nachgewiesen werden kann, liegt im Bereich von 10 bis 500 IE / ml.

Eine negative PCR-Analyse für Hepatitis C zeigt, dass die Viruskonzentration im Blut des Patienten unter der Empfindlichkeitsschwelle des Diagnosesystems liegt.

Wenn die PCR mit hoher Qualität die Antwort "nicht erkannt" ergab, ist es für die nachfolgende Behandlung wichtig, die Empfindlichkeitsschwelle des Reagens herauszufinden.

Proteinfraktionen zu Flavavirus erscheinen viel später.

Hepatitis C Quantitative PCR

Hepatitis C PCR quantitativ ist ein Indikator für die Viruslast, die die Konzentration der Flavavirus-RNA im Körper widerspiegelt. Dies ist ein Indikator, der angibt, wie viele Fragmente viraler RNA pro Kubikzentimeter Blut enthalten sind. Die Ergebnisse der PCR von Hepatitis-C-RNA in einem quantitativen Test im herkömmlichen System sind in internationalen Einheiten pro Milliliter (IE / ml) angegeben und können auf verschiedene Arten aufgezeichnet werden, beispielsweise 1,7 Millionen oder 1,700,000 IE / ml.

Patienten wird vor Beginn der antiviralen Therapie und in Woche 12 der Behandlung eine quantitative PCR-Diagnostik von Hepatitis C verschrieben, um die Ergebnisse der gewählten Methode zur Behandlung von HCV auszuwerten. Die Viruslast ermöglicht die Bestimmung von drei wichtigen Indikatoren der Krankheit:

• Infektiosität, d.h. das Risiko der Übertragung von Viren von einem Träger auf einen anderen (je höher die Konzentration der Flavavirus-RNA ist, desto höher ist die Wahrscheinlichkeit, eine andere Person zu infizieren, zum Beispiel durch sexuellen Kontakt);
• Methode und Wirksamkeit der Behandlung;
• Dauer und Prognose der antiviralen Therapie (je höher die Viruslast, desto länger dauert die Behandlung).

Die quantitative PCR-Diagnostik von Hepatitis C hängt von der Art des Labortests und der Empfindlichkeitsschwelle ab. Als untere Grenze der Norm gilt der Indikator bis 600.000 IE / ml, der Durchschnittswert liegt im Bereich von 600.000 bis 700.000 IE / ml. Ergebnisse von 800.000 IE / ml und darüber gelten als hohe Mengen an RNA-haltigen Viren.

Genotypisierung

Aufgrund der hohen Mutationsaktivität von HCV in der Natur ist es wichtig, beim Testen zu ermitteln, welcher Virus-Genotyp im Blut des Patienten liegt. Insgesamt wurden auf dem Planeten 11 Genotypen des Hepatitis-C-Virus nachgewiesen, zu denen viele Unterarten (Subtypen) gehören. Auf dem Territorium der Russischen Föderation verteilt 1,2 und 3.

Hepatitis-C-PCR-RNA ist zusammen mit der Genotypisierung ein sehr wichtiger Bestandteil der Analyse ermöglicht dem Arzt, die Resistenz (Resistenz) des Virus zu bestimmen, die geeigneten Medikamente auszuwählen und einen Behandlungsverlauf zu verschreiben.

Die Genotypisierung erlaubt auch eine indirekte Bestimmung des Leberzustands. Zum Beispiel wird der 3-Genotyp von HCV häufig von einer Steatose begleitet, bei der sich Fett in den Zellen des Organs ansammelt.

Ein Bluttest auf PCR für Hepatitis C sollte eine Zahl ergeben, die den Genotyp bestimmt. Laborreaktionen können "nicht typisiert" lauten. Dies bedeutet, dass sich ein Virus im menschlichen Blut befindet, das vom Testsystem nicht erkannt wird. Dies kann darauf hindeuten, dass der Genotyp für ein bestimmtes geografisches Gebiet nicht typisch ist. In diesem Fall sollten Sie die Analyse mit einer höheren Empfindlichkeit des Diagnosesystems wiederholen.

Dekodierung der PCR-Analyse bei Hepatitis C

Der Test zur quantitativen Entschlüsselung der Hepatitis C-PCR kann auf den obigen Daten basieren. Wenn Sie die Ergebnisse von Labortests erhalten, werden in der Regel folgende Daten geschrieben:

• "Gefunden" / "nicht gefunden" (hochwertige PCR für Hepatitis C);
• die Anzahl der RNA enthaltenden Fraktionen, zum Beispiel 831.680 ME / ml (quantitative PCR-Analyse);
• die Zahl, die den Genotyp von HCV bestimmt, zum Beispiel - 1, 2, 3, 4;
• Der Name des Tests lautet meistens Echtzeit.

Das Wichtigste beim Entschlüsseln der PCR-Analyse für Hepatitis C ist der zweite Punkt, der die Viruslast angibt, die die Prognose, Methode und Dauer der Behandlung bestimmt.

Wenn der PCR-Test auf Hepatitis C negativ ist und der ELISA positiv ist - was bedeutet das?

Um Labortests zu entschlüsseln, ist es wichtig, einen Hepatologen oder einen Spezialisten für Infektionskrankheiten zu kontaktieren, der die erhaltenen Informationen entsprechend dem Typ des Diagnosesystems und seiner Empfindlichkeitsschwelle erläutert. In der medizinischen Praxis gibt es viele Daten von Blutuntersuchungen, die eine Person ohne medizinische Ausbildung in die Irre führen können.

Wenn der Test auf Hepatitis-C-PCR beispielsweise negativ ist und der ELISA positiv ist, kann dies bedeuten, dass sich im Blut des Patienten momentan kein HCV befindet, er hatte jedoch zuvor eine akute Form von Hepatitis C erlitten Es gibt Antikörper im Blut, die nach der Invasion des Virus in der Vergangenheit produziert wurden. In der modernen medizinischen Praxis wird die ELISA-Analyse jedoch als unzureichend zuverlässig eingestuft und liefert oft untypische Ergebnisse. Daher verwenden Ärzte sie als primäres Screening. Bei der Diagnose einer Krankheit werden die Spezialisten durch PCR-Tests präzise geleitet.

Nützliches Video

Das folgende Video zeigt auf sehr detaillierte und interessante Weise, wie die Analyse durchgeführt wird:

Fazit

Zur Analyse der PCR von Hepatitis C wird in der Regel venöses Blut entnommen. Meist wird doppelt so viel biologisches Material aufgenommen - für ELISA und direkt für den PCR-Test. Für korrekte Testergebnisse ist die Einhaltung der Grundregeln für die Laborsammlung von biologischem Material erforderlich:

• Blut zur Analyse wird in der ersten Hälfte des Tages auf leeren Magen gegeben.
• zwischen Mahlzeit und Blutabnahme sollte mindestens 8 Stunden dauern;
• Alkohol und frittierte Speisen sollten vor der Testung ausgeschlossen werden.
• am Tag vor der Blutspende ist es notwendig, hohe körperliche Anstrengungen zu vermeiden.

Die Ergebnisse der Blutuntersuchung sind in der Regel am nächsten Tag verfügbar.