Zählung der weißen Blutkörperchen

Prinzip Leukozytenzählung während der Mikroskopie in einer bestimmten Anzahl von Quadraten der Zählkammer und Berechnung ihrer Anzahl in 1 Liter Blut unter Berücksichtigung der Verdünnung des Blutes und des Volumens der Zählkammer.

Reagenz: 3-5% ige Essigsäurelösung, getönt zum Anfärben von Leukozytenkernen mit einigen Tropfen Methylenblaulösung. Die Lösung hat eine blaue Farbe und kann lange aufbewahrt werden.

Der Weg der Entschlossenheit. In ein trockenes Reagenzglas gießen Sie 0,4 ml Essigsäurelösung. 0,02 ml Blut werden mit einem Finger gesammelt (Sie können mit Antikoagulans stabilisiertes venöses Blut verwenden). Wischen Sie die Pipettenspitze ab, blasen Sie anschließend Blut von unten bis zum Ende des Röhrchens, mischen Sie, wählen Sie erneut und blasen Sie die Mischung aus Blut und Reagenz (Pipettieren). Beschriften Sie das Röhrchen und lassen Sie es bis zum Zählen. Lagern Sie eine Mischung von Blut mit einer Essigsäurelösung nicht mehr als 2-4 Stunden.

Das mit Essigsäure in einem Reagenzglas verdünnte Blut wird sorgfältig gemischt und in eine Zählkammer gefüllt. Die gefüllte Kammer wird für 1 Minute in horizontaler Position gelassen, um die weißen Blutkörperchen abzusetzen. Ohne die horizontale Position der Kamera zu ändern, legen sie sie auf den Tisch des Mikroskops und zählen bei geringer Vergrößerung (Okular 10 ×, Linse 8 ×) die weißen Blutkörperchen in 100 großen Quadraten, was 1600 kleinen entspricht.

Zur Erhöhung der Genauigkeit werden Leukozyten in großen Quadraten über das Gitter gezählt und nicht in kleine Quadrate und Streifen unterteilt, beginnend an der oberen linken Ecke des Gitters. Um einen besseren Kontrast zu erzielen, verdunkeln Sie das Sichtfeld, lassen Sie den Kondensator fallen und schließen Sie die Blende. Die Zellen innerhalb des Quadrats, die auf zwei beliebigen Linien liegen, werden gezählt, um dieselbe Zelle nicht zweimal zu zählen.

Die Berechnung der Anzahl der Leukozyten erfolgt nach der Formel:

wobei X die Anzahl der Leukozyten in 1 ul Blut ist; und - die Anzahl der Leukozyten in 100 großen Quadraten; 20 - Blutverdünnung; 100 ist die Anzahl der großen Quadrate; 250 ist der Umrechnungsfaktor pro 1 & mgr; l, da das Volumen eines großen Quadrats 1/250 & mgr; l beträgt (die Seite des Quadrats beträgt 1/5 mm, die Höhe beträgt 1/10 mm).

Um die Anzahl der Leukozyten in 1 µl Blut zu berechnen, wird ihre Anzahl in 100 großen Quadraten mit 50 und in 1 Liter multipliziert. Der resultierende Wert wird mit 106 multipliziert.

Hinweis Bei der Zählung von Leukozyten ist ein Fehler in 6-8% der Fälle unvermeidlich.

  1. Bei einer großen Anzahl von Normozyten im peripheren Blut werden sie nach Leukozyten (sowohl Leukozyten als auch Normozyten - kernhaltige Zellen) gezählt. Um die Anzahl der Leukozyten richtig zu bestimmen, sollten von der Gesamtzahl der kernhaltigen Blutzellen die Anzahl der Normozyten abgezogen werden.
  2. Die verbleibenden Fehler sind ähnlich wie bei der Berechnung der Anzahl der roten Blutkörperchen in der Zählkammer.

Leukozytenzahl

Um Blut im Leukozytenmischer bis zur Markierung 0,5 zu sammeln. Geben Sie dem Blut sofort eine Verdünnungslösung aus 3% iger Essigsäure zur Markierung 11. Mischen Sie den Inhalt der Kapillare gründlich und füllen Sie die Kammer von Goryaev damit wieder auf. Die Zählung erfolgt in mindestens 100 großen Feldern. Dies sind große, ungefütterte Linien, die im Raster der Goryaev-Kamera in vier Gruppen gruppiert werden. Berechnen Sie die Anzahl der Leukozyten in 1 l Blut anhand der folgenden Formel:

L = N × 4000 × 20 × 10 6

wobei: N die Anzahl der Leukozyten in hundert großen Quadraten ist; 4000 ist ein Multiplikator, der das Volumen eines kleinen Quadrats auf das Volumen von 1 µl Blut reduziert; 20 - Korrektur für den Grad der Blutverdünnung; 1600 - die Anzahl der Leukozyten in kleinen Quadraten; 10 6 - die Anzahl der Mikrolithen in 1 l.

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Abschließend die erzielten Ergebnisse mit den Normalwerten vergleichen.

Labor Nr. 7.3

Bestimmung der Hämoglobinmenge im Blut

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Zählung der weißen Blutkörperchen

Leukozytose kann absolut (wahr) und relativ (umverteilend) sein.

Absolute Leukozytose wird bei akuten entzündlichen Prozessen, Gewebenekrose, akuten bakteriellen Infektionen (mit Ausnahme von Typhus, Brucellose, Tularämie usw.), allergischen Zuständen, malignen Tumoren (mit Gewebezerstörung), geschlossenen Kopfverletzungen und Hämorrhagien, Diabetes beobachtet. urämisches Koma, Schock, akuter Blutverlust, als Hauptreaktion - mit Strahlenkrankheit. Bei Leukämie tritt eine signifikante Zunahme der Leukozytenzahl auf.

Relativ (Redistributiv) ist eine Folge des Erhalts von Leukozyten im Blutfluss von den Organen, die für ihr Depot dienen. Sie tritt nach dem Essen (Nahrungsmittelleukozytose), heißen und kalten Bädern, starken Emotionen (vegetovaskuläre Leukozytose), intensiver Muskelarbeit (myogener Leukozytose) usw. auf.

Leukopenie Leukopenie gilt als Indikator für die Hemmung der Funktionsfähigkeit des Knochenmarks durch Exposition gegenüber toxischen Substanzen (Arsen, Benzol usw.), einigen Medikamenten (Sulfanilamiden, Chloramphenicol, Butadion, Immuno, Cyclophosphamid usw.), Viren (Influenza, Virushepatitis), Masern usw.), Mikroben (Typhus, Brucellose usw.), ionisierende Strahlung, Röntgenstrahlen und Hypersplenismus (erhöhte Milzfunktion).

Leukozytose und Leukopenie sind selten durch eine proportionale Zunahme (Abnahme) der Gesamtzahl an Leukozyten aller Art gekennzeichnet (z. B. Leukozytose mit Blutverdickung); In den meisten Fällen gibt es eine Zunahme (Abnahme) der Anzahl eines beliebigen Zelltyps, daher werden die Ausdrücke "Neutrophilie", "Neutropenie", "Lymphozytose", "Lymphopenie", "Eosinophilie", "Eosinopenie", "Monozytose", "Monocytopenie" verwendet, "Basophilia".

Bei der klinischen Bewertung von Veränderungen der Anzahl der Leukozyten wird dem prozentualen Verhältnis der einzelnen Leukozytenformen, dh der Leukozytenformel, große Bedeutung beigemessen.

Leukozytenblutbild einer gesunden Person:

Relativer Betrag Absoluter Betrag

Basophile …………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eosinophile ………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neutrophile: - Myelozyten............ 0% fehlen

- erstochen... 1-6% 0,040–0,300 × 10 9 / l

- segmentiert….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Lymphozyten …………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L

Monozyten …………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L

Die Leukozytenzählung wird in gefärbten peripheren Blutabstrichen durchgeführt. Für die korrekte Interpretation der Ergebnisse der Studie der Leukozytenformel wird empfohlen, in absoluten Mengen zu zählen, jedoch nicht in relativen. Die verbreitetsten Malmethoden von Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Beim Eintauchen werden mindestens 200 Zellen gezählt und anschließend das prozentuale Verhältnis bestimmter Leukozytenarten abgeleitet. Die Analyse des Leukogramms unter Berücksichtigung anderer Blutparameter und des Krankheitsbildes ist eine wertvolle Untersuchungsmethode, sie hilft bei der Diagnose und Bestimmung der Prognose der Krankheit.

Die Hauptursachen für Neutrophilie.

Akute bakterielle Infektionen - lokalisiert und verallgemeinert.

Entzündung oder Nekrose des Gewebes.

Medizinische Wirkungen (Kortikosteroide).

Die Hauptursachen für Neutropenie.

Infektionen - bakterielle Erkrankungen (Typhus, Brucellose, Tularämie, Paratyphus) und Viren (infektiöse Hepatitis, Masern, Influenza, Röteln und andere).

Myelotoxische Wirkungen und Unterdrückung der Granulozytopoese (ionisierende Strahlung; chemische Mittel - Benzol, Anilin, DDT; medizinische Wirkungen - Zytostatika und Immunsuppressiva; Vitamin-B12-Folsäuremangelanämie, akute aleukämische Leukämie, aplastische Anämie).

Antikörper-Exposition (Immunformen) - Überempfindlichkeit gegen Medikamente, Autoimmunkrankheiten (SLE, rheumatoide Arthritis, chronische lymphatische Leukämie), Isoimmun-Manifestationen (hämolytische Erkrankung des Neugeborenen).

Umverteilung und Ablagerung in Organen - Schockzustände, Erkrankungen mit Splenomegalie und Hypersplenismus.

Erbliche Formen (familiäre gutartige chronische Neutropenie).

Die Hauptursachen für Eosinophilie.

Parasitäre Invasionen (Trichinose).

Chronische Hautläsionen - Psoriasis, Pemphigus, Ekzem.

Tumoren (eosinophile Varianten von Leukämie).

Andere Krankheiten - fibroplastische Endokarditis Lefflera, Scharlach.

In der Erholungsphase von Infektionen und entzündlichen Erkrankungen (günstiges prognostisches Zeichen).

Ursachen der Eosinopenie (Aneosinophilie).

Erhöhte Adrenocorticosteroid-Aktivität im Körper.

Die Hauptursachen für Basophilie:

Chronische myeloische Leukämie und Erythrämie.

Die Hauptursachen der Monozytose.

Subakute und chronische bakterielle Infektionen.

Parasitäre Infektionen - Leishmaniose, Malaria.

Hämoblastose - monozytäre Leukämie, Lymphogranulomatose, Lymphome.

Andere Zustände sind SLE, Sarkoidose, rheumatoide Arthritis, infektiöse Monozytose; in der Zeit der Erholung von Infektionen, beim Verlassen der Agranulozytose, nach Splenektomie.

Die Abnahme der Anzahl der Monozyten ist vor allem für die Beurteilung des Lymphozyten-Monozyten-Verhältnisses bei der Lungentuberkulose von Bedeutung.

Die Hauptursachen für Lymphozytose.

Infektionen - akute Viren (infektiöse Mononukleose, Masern, Röteln, Windpocken), chronische Bakterien (Tuberkulose, Syphilis, Brucellose), Protozoen (Toxoplasmose).

Hämoblastose (lymphatische Leukämie, Lymphom).

Andere Krankheiten - Hyperthyreose, Addison-Krankheit, Vitamin B12-Foliummangelanämie, hypo- und aplastische Anämie.

Lymphozytopenie wird bei SLE, Morbus Hodgkin, weit verbreiteter Lymphknoten-Tuberkulose, im Endstadium von Nierenversagen, akuter Strahlenkrankheit, Immunschwäche, Glukokortikoiden beobachtet.

Die Zunahme oder Abnahme der Anzahl bestimmter Arten von Leukozyten im Blut kann relativ oder absolut sein. Wenn sich nur der Prozentsatz einer bestimmten Art von weißen Blutkörperchen ändert, treten relative Neutrophilie, relative Eosinopenie usw. auf. Die Erhöhung oder Abnahme des absoluten Gehalts jeder Art von Leukozyten, d. H. Die Anzahl dieser Zellen pro Volumeneinheit Blut, wird als absolute Neutrophilie, absolute Eosinopenie usw. bezeichnet.

Die Verschiebung der Formel nach links (Erhöhung der Anzahl junger Formen von Neutrophilen) ist ein Zeichen für eine Entzündung oder einen nekrotischen Prozess im Körper.

Die Verschiebung der Leukozytenformel nach rechts ist charakteristisch für Strahlenkrankheit und Vitamin-B12-Folsäuremangelanämie.

Die Abwesenheit oder signifikante Verringerung der Anzahl aller Arten granulärer Leukozyten - Granulozyten (Neutrophile, Eosinophile, Basophile) wird mit dem Begriff Agranulozytose bezeichnet. Abhängig vom Mechanismus des Auftretens werden myelotoxische Wirkungen (Auswirkungen ionisierender Strahlung, Zytostatikaeinnahme) und Immunreaktionen (Hapten und Autoimmun-Agranulozytose) unterschieden.

Leukozytenzahl

Die Zählmethode in der Kamera. Entnahme und Verdünnung von Blut, das mit der Röhrenmethode produziert wird. In das Röhrchen (vorzugsweise Vidalevskaya) werden 0,4 ml der Verdünnungsflüssigkeit und 0,02 ml Kapillarblut eingeführt. Die resultierende Verdünnung wird praktisch als 1:20 angesehen. Eine 3-5% ige Lösung von mit Methylenblau gefärbter Essigsäure wird gewöhnlich als Verdünnungsmittel verwendet (Essigsäure lysiert Erythrozyten, Methylenblau färbt die Kerne von Leukozyten). Vor dem Befüllen der Kammer wird das Goryaeva-Röhrchen mit verdünntem Blut gründlich geschüttelt. Die Kammer wird wie bei der roten Blutkörperchenfüllung gefüllt.

Leukozyten sind viel kleiner als Erythrozyten (1–2 pro großes Quadrat), daher werden für die Genauigkeit Zählungen in 100 großen Quadraten (nicht bewertet) vorgenommen. Berechnung: 100 große Quadrate (1600 kleine) werden als Leukozyten gezählt.
Wenn man bedenkt, dass das Volumen eines kleinen Quadrats 1/4000 mm3 beträgt und das Blut 20-fach verdünnt wird, wird die Anzahl der Leukozyten in 1 μl Blut berechnet: 4000 bis 20 und dividiert durch 1600 = a x 1/2. Um den tatsächlichen Gehalt an Leukozyten in 1 & mgr; l Blut zu erhalten, ist es praktisch ausreichend, die in der Berechnung erhaltene Anzahl zu halbieren und 2 Nullen hinzuzufügen. Der durchschnittliche Methodenfehler beträgt ± 7%.

Genauer (2-3% Fehler) und perfekt ist die Anzahl der Leukozyten, die elektronische Geräte verwenden. Die Zählung der Leukozyten in Teilchenzählern erfolgt nach dem gleichen Prinzip wie Erythrozyten. Das Vorblut wird verdünnt und mit einem Reagenz gemischt, das rote Blutkörperchen lysiert. Im Autoanalyzer "Technicon" wird eine Lösung von Essigsäure als solche verwendet, in den Geräten "Culter" und "Celloskop" - Saponin oder Sapoglobin, die verdünnt (1: 500, 1: 700) in isotonischer Natriumchloridlösung (6 Tropfen pro 20 ml) zugegeben werden Zucht).

Die Blutleukozytenzählung wird in gefärbten peripheren Blutabstrichen durchgeführt.
Es ist besser, an der dünnsten Stelle nahe dem Ende des Abstrichs mindestens 200 Zellen (außer bei ausgeprägter Leukopenie) zu zählen, und dann den prozentualen Anteil bestimmter Arten von weißen Blutkörperchen abzuleiten. Es wird empfohlen, in der gleichen Reihenfolge zu zählen: Die Hälfte der Zellen sollte oben, die Hälfte unten am Strich gezählt werden, ohne an den Rand und in die Mitte zu gehen (zickzackförmig) (3-4 Sichtfelder entlang des Strichs, 3-4 Felder rechtwinklig zur Mitte des Striches). dann 3-4 Felder zur Seite parallel zur Kante, wieder rechtwinklig nach oben und so weiter zu einer Seite).

Vorbereitung der Abstriche Sorgfältig gewaschenes und entfettetes Glas (sein Rand) berührt einen Blutstropfen an der Injektionsstelle. Schmieren Sie das Schleifglas, indem Sie es in einem Winkel von 45 ° zum Objektträger vor dem Tropfen ablegen. Nachdem sie das Glas zu diesem Tropfen gebracht haben, warten sie, bis sich das Blut entlang der Kante ausbreitet. Dann führen sie das Glas mit einer schnellen Bewegung vorwärts aus und nehmen es nicht aus dem Objekt, bevor es den gesamten Tropfen ausgetrocknet hat.

Ein richtig gemachter Abstrich hat eine gelbliche Farbe (dünn), reicht nicht an die Ränder des Glases und endet in einer Spur (Schnurrbart).

Trockene Abstriche nach anfänglicher Fixierung. Die beste Fixierung wird in absolutem Methylenalkohol (3-5 Minuten) oder in einer Mischung aus Nikiforov aus gleichen Teilen absolutem Ethanol und Ether (30 Minuten) erzielt.

Zu den wichtigsten hämatologischen Farben gehören Methylenblau und sein Derivat - Azure I (Methylenazure) und Azure II (eine Mischung aus gleichen Teilen Azure I und Methylenblau) bis zu säurehaltigem, wasserlöslichem gelbem Eosin.

● Gemälde von Romanovsky-Giemsa. Romanovsky-Giemsa-Farbe (im Werk hergestellt) hat die folgende Zusammensetzung: Azur II - 3 g, wasserlösliches gelbes Eosin - 0,8 g, Methylalkohol - 250 ml und Glycerin - 250 ml. Die Arbeitslacklösung wird mit einer Rate von 1,5 bis 2 Tropfen des fertigen Lackes pro 1 ml destilliertem Wasser hergestellt. Die Farbe wird auf einen Abstrich mit einer möglicherweise höheren Schicht gegossen; Färbezeit - 30-35 Minuten Nach dieser Zeit werden die Tupfer mit Wasser gewaschen und an der Luft getrocknet. Bei diesem Verfahren ist es möglich, den Kern gut zu unterscheiden, aber die neutrophile Granularität des Cytoplasmas ist viel schlechter, so dass es häufig zum Anfärben eines peripheren Blutausstrichs verwendet wird.

● Kombinierte May-Grunwald-Romanovsky-Giemsa-Färbung nach Pappenheim. Ein fertiger Farbstoff, ein May-Grunwald-Fixiermittel, bei dem es sich um eine Lösung von Eosinmethylenblau in Methylenalkohol handelt, wird 3 Minuten lang auf einen fixierten Abstrich pipettiert. Nach 3 Minuten wird dem Lack, der die Lösung bedeckt, eine gleiche Menge destilliertes Wasser zugesetzt, und die Färbung wird noch 1 Minute fortgesetzt. Danach wird die Farbe abgewaschen und der Abstrich an der Luft getrocknet. Dann wird der getrocknete Abstrich 8-15 Minuten lang mit einer frisch zubereiteten wässerigen Lösung von Romanovsky-Farbe überstrichen. Diese Methode wird als die beste angesehen, insbesondere für Markpunktionen.

Eine Zunahme der Leukozytenzahl im peripheren Blut über dem normalen Niveau wird als Leukozytose bezeichnet, eine Abnahme wird als Leukopenie bezeichnet. Leukozytose (Leukopenie) ist selten durch eine proportionale Zunahme (Abnahme) der Anzahl von Leukozyten aller Art gekennzeichnet, beispielsweise Leukozytose mit Blutverdickung. In den meisten Fällen steigt die Anzahl (Abnahme) eines beliebigen Zelltyps. Die Zunahme oder Abnahme der Anzahl einzelner Leukozytenarten im Blut kann relativ oder absolut sein, abhängig von der Gesamtzahl der Leukozyten - normal, erhöht oder erniedrigt. Die Veränderung der Anzahl, des Verhältnisses der einzelnen Formen und der Morphologie der Leukozyten hängt von der Art und Virulenz des Erregers, der Art, dem Verlauf und dem Ausmaß des pathologischen Prozesses, der individuellen Reaktion des Organismus ab.

Leukozyten (Leukozyten)

Leukozyten Quantitative Leukozytenbestimmung. Leukozyten zählen mit der Kamera Goryaeva. Quantitativer Gehalt an Leukozyten. Leukozytose.

Weiße Blutkörperchen

Die Anzahl der Leukozyten im Blut hängt sowohl von der Geschwindigkeit ihrer Entstehung als auch von deren Mobilisierung aus dem Knochenmark ab sowie von ihrer Verwendung und Migration in das Gewebe (zu den Läsionen), die von Lunge und Milz eingefangen werden. Diese Vorgänge wiederum werden von einer Reihe physiologischer Faktoren beeinflusst, und daher ist die Anzahl der Leukozyten im Blut eines gesunden Menschen Schwankungen unterworfen: Sie steigt am Ende des Tages, während körperlicher Anstrengung, emotionaler Belastung, Einnahme von Eiweißnahrung und abrupten Änderungen der Umgebungstemperatur.

Quantitative Leukozytenbestimmung

Leukozyten werden mit der Goryaev-Kamera und mit automatischen Zählern gezählt.

Leukozyten zählen mit der Kamera Goryaeva

Mit der In-vitro-Methode der Blutentnahme zur Zählung von Leukozyten:

  • 0,4 ml einer mit Methylenblau gefärbten Lösung von 3-5% Essigsäure werden in das Röhrchen gegossen. Mit einer Kapillarpipette 20 µl Blut aus einem frischen Tropfen entnehmen (20-fache Verdünnung), vorsichtig mit Reagenz in ein Reagenzglas blasen und die Pipette spülen. Gut mischen;
  • Ein sauberes und trockenes Deckglas wird auf die Kammer gerieben, so dass sich Regenbogenringe an der Kontaktstelle bilden.
  • Blut in einem Reagenzglas verdünnt, gut mischen. Das Ende eines runden Glasstabes nimmt einen Tropfen Blut und bringt es an den Rand des polierten Glases der Kammer;
  • Nach dem Befüllen der Kammer wird sie 1 Minute lang zur Sedimentation von Leukozyten stehen gelassen;
  • Leukozyten werden bei niedriger Vergrößerung (Objektiv × 8 oder × 9, Okular × 10 oder × 15) mit einem verdunkelten Sichtfeld (mit verringertem Kondensor oder verengter Membran) betrachtet;
  • für zufriedenstellende Ergebnisse werden Leukozyten in 100 großen Quadraten gezählt.

Wenn Sie das Volumen eines großen Quadrats und den Verdünnungsgrad des Blutes kennen, ermitteln Sie die Anzahl der Leukozyten in 1 µl und 1 l Blut. Die Seite des großen Quadrats beträgt 1/5 mm, die Fläche beträgt 1/25 mm2, das Raumvolumen oberhalb dieses Quadrats beträgt 1/250 mm3.

Formel zur Zählung der weißen Blutkörperchen:

wobei B die Anzahl der Leukozyten in 100 großen Quadraten ist;
P - der Verdünnungsgrad (20).

Leukozytenzahl

Norm: 4,0–9,0 × 10 9 / L

Die Zunahme der Anzahl der Leukozyten über 9,0 × 10 9 / l wird bezeichnet
Leukozytose, eine Abnahme ihrer Zahl unter 4,0 × 10 9 / l - Leukopenie. Es können jedoch sogar 3,5 × 10 9 in 1 l Leukozyten für eine Anzahl von Individuen die Norm sein. Laut Literatur haben diese Menschen eine erhöhte Immunabwehr und sind seltener krank. Dies scheint darauf zurückzuführen zu sein, dass eine Immunreaktion eine Leukozytenreserve in Geweben vorsieht, in denen 50-60-mal mehr vorhanden sind als in der Blutbahn. Offensichtlich sind bei gesunden Personen mit niedrigen Leukozytenzahlen im peripheren Blut ihre Reserven im Gewebe entsprechend erhöht. Dieses Phänomen wird durch den erblichen und familiären Charakter oder durch eine Zunahme des Einflusses des parasympathischen Nervensystems erklärt.

Leukopenie kann funktionell und organisch sein.
Funktionelle Leukopenie ist mit einer Fehlregulierung der Blutbildung verbunden und wird beobachtet:

  • bei einigen bakteriellen und viralen Infektionen (Typhus, Influenza, Pocken, Röteln, Morbus Botkin, Masern);
  • unter der Wirkung von Medikamenten (Sulfonamide, Analgetika, Antikonvulsiva, Antithyreose, Zytostatika und andere Arzneimittel);
  • während der Muskelarbeit die Einführung von Fremdproteinen, Nerven- und Temperatureffekten, Hunger, hypotonische Zustände;
  • Eine falsche Leukozytopenie kann mit einer Leukozytenaggregation während einer Langzeitlagerung von Blut bei Raumtemperatur (mehr als 4 Stunden) verbunden sein.

Organische Leukopenie infolge von Knochenmarkaplasien und deren Ersatz durch Fettgewebe tritt auf, wenn:

  • aplastische Anämie;
  • Agranulozytose;
  • Leukopenische Leukämie;
  • einige Formen der Hodgkin-Krankheit;
  • ionisierende Strahlung;
  • Hypersplenismus (primär und sekundär);
  • Kollagenerkrankungen.

Leukozytose

Leukozytose ist die Reaktion des hämatopoetischen Systems auf die Auswirkungen
exogene und endogene Faktoren. Es gibt physiologische und pathologische Leukozytose.

Physiologische Leukozytose ist:

  • Verdauungs - nach dem Essen, besonders reich an Eiweiß; Die Anzahl der Leukozyten überschreitet nicht 10,0–12,0 × 10 9 / l und kehrt nach 3-4 Stunden zum Normalzustand zurück.
  • bei emotionalem Stress (Adrenalin), schwerer körperlicher Anstrengung, Abkühlung, übermäßiger Sonneneinstrahlung (Sonnenbrand), Verabreichung einer Reihe von Hormonen (Katecholamine, Glucocorticosteroide usw.), in der zweiten Hälfte der Schwangerschaft, während der Menstruation und aufgrund der ungleichen Verteilung der Leukozyten im Blut der Mainstream.

Die pathologische Leukozytose unterscheidet sich in absolut und relativ.

Absolute Leukozytose - ein Anstieg der Leukozytenzahl im Blut auf mehrere Hunderttausend (100,0–600,0 × 10 9 / l und mehr).

  • Am häufigsten beobachtet bei Leukämie: bei chronischer Leukämie - in 98-100% der Fälle, bei akuter Leukämie - in 50-60%. Die Veränderung des Leukozytenanteils in Knochenmark und Blutpunktion dient als Grundlage für die Diagnose von Leukämie.

Relative Leukozytose wird beobachtet:

  • akute entzündliche und infektiöse Prozesse, mit Ausnahme von Typhus, Influenza, Pocken, Röteln, Morbus Botkin, Masern. Die größte Leukozytose (bis zu 70,0–80,0 × 10 9 / l) wird bei der Sepsis beobachtet;
  • unter dem Einfluss toxischer Substanzen (Insektengifte, Endotoxine), ionisierende Strahlung (unmittelbar nach der Bestrahlung);
  • infolge der Wirkung von Corticosteroiden, Adrenalin, Histamin, Acetylcholin und Digitalis-Präparaten;
  • bei Gewebezerfall (Nekrose), Myokardinfarkt, Thrombose peripherer Arterien mit Gangränentwicklung, Verbrennungen, exsudativer Pleuritis, Perikarditis, Urämie, Leberkoma;
  • erheblicher Blutverlust bei Verletzungen, inneren, gynäkologischen und anderen Blutungen.

Die Zunahme der Leukozytenzahl bei Infektionskrankheiten geht meistens mit einer Verschiebung der Leukozytenformel nach links einher

Zählen der Anzahl der Leukozyten und Blutplättchen

Faktoren, die die Korrektheit der Untersuchung von weißen Blutkörperchen beeinflussen

- lange Lagerung von Blut bei Raumtemperatur

Normen des Leukozytengehalts im Blut

Alter Anzahl der Leukozyten

- 1 Tag 11,6 - 22,0

- 1 Woche 8.1.- 14.3

- 1 Monat 7.6 - 12.4

- Erwachsene 4,0 - 9,0

Methoden zur Bestimmung der Leukozytenzahl im Blut.

- Zählen der Leukozytenzahl in der Zählkammer

- Leukozytenzählung in hämatologischen Analysegeräten

Bestimmung der Anzahl der Leukozyten in der Zählkammer.

- Die Leukozyten werden unter einem Mikroskop gezählt, nachdem rote Blutkörperchen in 100 großen Quadraten des Zählgitters aufgelöst und für 1 Liter Blut neu berechnet wurden, basierend auf dem Volumen der Quadrate und der Verdünnung des Blutes. Die Zählung der Leukozyten sollte innerhalb von 2-4 Stunden nach der Blutentnahme erfolgen.

- Wenn im peripheren Blut kernhaltige rote Blutkörperchen vorhanden sind, werden sie nicht lysiert und zusammen mit Leukozyten gezählt. In diesem Fall wird zur Bestimmung der wahren Anzahl von Leukozyten die Anzahl der Zellen in der roten Reihe von der Gesamtzahl der gezählten Zellen abgezogen.

- Zum Beispiel: Die Gesamtzahl der Leukozyten bei der Berechnung in der Kammer (oder im Analysator) -45x109 / l. Bei der Berechnung der Leukozytenformel wurde festgestellt, dass pro 100 Leukozyten 50 Erythroblasten (Normoblasten) vorhanden sind.

Wir berechnen die wahre Anzahl der Leukozyten im Blut:

150 Zellen - 45 x 109 / l

100 Zellen (Leukozyten) - X

X = 100 × 45 × 10 / l / 150 = 30 × 10 / l

Somit beträgt die wahre Anzahl der Leukozyten im Blut 30 x 109 / l.

Die Hauptfehlerquellen bei der Berechnung von Leukozyten in der Kammer:

- Falsches Verhältnis von Blut- und Essigsäurevolumen in einem Reagenzglas.

- Falsch hergestellte Essigsäurelösung (bei einer Konzentration von mehr als 5% können einige Leukozyten lysieren, was zu einer Unterschätzung des Ergebnisses führt).

- Längere Exposition der Probe bei Temperaturen über 28 ° C, was die Lyse von Leukozyten in der Probe beschleunigen und zu einer Unterschätzung des Ergebnisses führen kann.

- Falsche Füllung der Goryaev-Kammer. Wie bei der Berechnung der roten Blutkörperchen muss die Kamera 1 Minute lang stehen, um die Zellen zu setzen.

- Die Goryaev-Kamera wurde nach der vorherigen Definition nicht gut genug gewaschen. In der Kammer verbleibende Leukozyten können die Ergebnisse der Analyse überschätzen.

Thrombozytenzählmethoden

- in der Zählkammer

Jede Gruppe von Methoden hat Vor- und Nachteile.

- Die Zählung der Blutplättchen in der Kammer ist ausreichend genau und erfordert keine Berechnung der Anzahl der roten Blutkörperchen. Andererseits ist diese Methode aufwendiger, da die Plättchen in der nativen Form durch kleine und wenig kontrastierende Elemente dargestellt werden. Der Nachteil der Methode ist die Thrombozytenzählung in den nächsten Stunden nach der Blutentnahme.

- Die Bestimmung der Anzahl der Blutplättchen in Blutausstrichen ist in ihrer Genauigkeit der Kammermethode oder den automatischen Zählern deutlich unterlegen. Fehler beim Zählen in Blutausstrichen können auf schlechte Qualität des Abstrichs und die damit einhergehende ungleichmäßige Verteilung der Blutplättchen zurückzuführen sein, was die Anzahl der roten Blutkörperchen ungenau bestimmt. Ein wesentlicher Nachteil des Verfahrens besteht darin, dass gleichzeitig Blutplättchen und rote Blutkörperchen im Blut gezählt werden müssen. Der Vorteil ist die Fähigkeit, Thrombozyten unabhängig von der Zeit der Blutentnahme jederzeit zu untersuchen.

- Mit der Methode zur Bestimmung von Blutplättchen mit einem Hämatologieanalysator können Sie die Anzahl der Blutplättchen, ihr durchschnittliches Volumen und ihre Volumenverteilung genau bestimmen.

Leukozytenzahl

Die Anzahl der Leukozyten wird mit einem automatischen Zähler oder in einer Goryaev-Kammer berechnet. Um die Leukozyten in der Kammer zu zählen, wird eine türkische Flüssigkeit hergestellt - eine Essigsäurelösung, die mit einer wässrigen Lösung von Methylenblau gefärbt ist (0,1 ml einer 0,1% igen Lösung von Methylenblau werden zu 9 ml 10% iger Essigsäure gegeben). In ein Reagenzglas gießen Sie 0,4 ml flüssiges Türk. Nehmen Sie genau 0,02 ml Blut auf und geben Sie es vorsichtig in die Verdünnungsflüssigkeit. Blutverdünnung beträgt 1:20. Gut mischen und 4 Minuten ziehen lassen. Füllen Sie die Kammer Goryaeva, nachdem Sie das Röhrchen vorsichtig mit verdünntem Blut geschüttelt haben. Die Kamera wird zur Ablagerung von Leukozyten 1 Minute auf einer ebenen Fläche belassen. Dann werden Leukozyten bei geringer Vergrößerung des Mikroskops (Linse 8, Okular 10 oder 15) mit einem verdunkelten Sichtfeld gezählt (bei abgesenktem Kondensator oder verengter Blende). Leukozyten befinden sich in 100 nicht offengelegten großen Quadraten, was 1600 kleinen entspricht. Die Ergebnisse der Zellzählung in großen Quadraten fassen zusammen und berechnen deren Anzahl in 1 µl Blut nach folgender Formel:


wobei X die Anzahl der Leukozyten in 1 ul Blut ist; A - Anzahl der Zellen in 100 großen Feldern, 1600 - Anzahl der kleinen Felder; 20 - Blutverdünnung; 4000 ist ein Multiplikator, der ein Volumen von 1 µl Blut ergibt, bezogen auf das Volumen eines kleinen Quadrats (1/4000 µl).

Zählung der Leukozytenformel: Gefärbte periphere Blutausstriche werden untersucht. Eine notwendige Voraussetzung für die korrekte Berücksichtigung der morphologischen Merkmale von Blutzellen ist ein ordnungsgemäß hergestellter und gut gefärbter Blutausstrich. Auf trockenen, sauberen und gut entfetteten Objektträgern wird ein Blutausstrich hergestellt, der in einer Mischung aus Nikiforov (Ethylalkohol 96 º und Diethylether 1: 1) gealtert wird. Nehmen Sie ein Glasobjektiv für lange Kanten, berühren Sie seine Oberfläche mit einem durch die Punktion freigesetzten Blutstropfen (aber nicht mit Haut), oder geben Sie einen Blutstropfen mit einer Mikropipette oder einer Kapillare auf. Eine Glasscheibe wird auf dem Tisch oder in der linken Hand für schmale Kanten gehalten. Tragen Sie mit der rechten Hand das geschliffene Glas mit einem schmalen Rand auf das Glas auf, wobei sich das Blut in einem Winkel von 45 ° links vom Tropfen befindet, und drücken Sie es nach rechts, bis es das Blut berührt. Sie warten, bis sich das Blut über die gesamte Kante des Mattglases verteilt, und führen es dann mit einer schnellen, schnellen Bewegung von rechts nach links, bis der gesamte Tropfen erschöpft ist. Ein Blutstropfen sollte klein und proportioniert sein, so dass der gesamte Abstrich auf dem Glas platziert wird und nicht 1-1,5 cm vor seinem Rand erreicht wird. Ein gut gemachter Abstrich ist dünn, hat eine gelbliche Farbe und endet in einem "Besen". Luftgetrocknete Blutabstriche werden zur Fixierung in Spezialschalen oder in gewöhnliche mit Fixierflüssigkeit gefüllte Gläser (Methylalkohol, Fixierzeit 3-5 Minuten; Ethylalkohol 30 Minuten; Nikiforov-Mischung 20-30 Minuten) gegeben. Feste Präparate werden an der Luft getrocknet und dann mit Romanovsky-Giemsa-Farbstoff angefärbt. Die fertige Lacklösung Romanovsky-Giemsa (Azureosin) verdünnte 1:10 im für die Färbung erforderlichen Volumen. Feste Abstriche werden mit verdünnter Farbe gegossen, die mit einer möglicherweise höheren Schicht auf den Abstrich gegossen wird. Die Färbung dauert je nach Lufttemperatur im Raum 25 bis 45 Minuten. Nach dem Lackieren den Lack mit destilliertem Wasser abwaschen und die Holzstriche zum Trocknen senkrecht in einen Holzständer stellen. Die Mikroskopie der Blutausstriche wird unter Eintauchen bei einer Vergrößerung von 100 × 10 durchgeführt. Die Leukozytenzählung erfolgt entlang einer Zickzacklinie ("Meanderlinie"). Unter Berücksichtigung der Anzahl der einzelnen Leukozytenformen werden 100-200 Zellen gezählt: Stich- und Segmentneutrophile, Eosinophile, Basophile, Monozyten, Lymphozyten. Berechnen Sie den Prozentsatz jedes Zelltyps.

Zählen der absoluten Anzahl von Phagozyten und Lymphozyten Die absolute Anzahl von Phagozyten (Neutrophilen und Monozyten) und Lymphozyten höherer Wirbeltiere wird auf der Grundlage von Daten zur Anzahl der Leukozyten in peripherem Blut und der Leukozytenformel berechnet.

Phagozytischer Funktionstest

Bestimmung des Phagozytenindex und der Phagozytenzahl

Eine große Anzahl von Techniken wurde entwickelt, um die Absorptions- und Verdauungsaktivität von Leukozyten zu bewerten. Alle basieren auf der Fähigkeit von Phagozyten, Fremdpartikel zu absorbieren, aus denen das Testsystem besteht (eine bestimmte Art von Mikroorganismen, Zymosan, Latex - das Objekt der Absorption). Offenbarung wird in vitro oder in vivo durchgeführt. Der allgemeine Ablauf der Bestimmung ist wie folgt: Heparinisiertes oder citriertes frisches Blut (oder Phagozytensuspension) wird mit einem gleichen Volumen suspendierter täglicher mikrobieller Suspension (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E. coli, A. nydrophila) oder einem anderen Absorptionsobjekt gemischt. Die Mischung wird vorsichtig gemischt und in einen Thermostat gestellt (37-40 ° C - warmblütig je nach normaler Körpertemperatur, 26 ° C - wärmeliebende Fische und niedriger für kaltliebende Tiere). Nach 15, 30, 45, 60 und 90 Minuten werden Abstriche auf Objektträgern hergestellt, getrocknet, mit Methylalkohol oder einer Nikiforov-Mischung fixiert und gemäß Romanovsky-Giemsa gefärbt. Sie betrachten Abstriche unter Immersion und bestimmen die Phagozytenaktivität - den Prozentsatz der an der Phagozytose beteiligten Phagozyten, den Phagozytenindex - die Anzahl der von einem Phagozytenleukozyten gefangenen Testmikroben, die Phagozytenzahl - die durchschnittliche Anzahl der phagozytischen Objekte pro aktivem Neutrophil. Die Auswertung von Indikatoren zu verschiedenen Zeitintervallen ermöglicht es uns, die Dynamik der Phagozytose abzuschätzen. Normalerweise sollte der Phagozytenindex nach 90 Minuten aufgrund der Verdauung von Mikroben niedriger als nach 45 Minuten und 60 Minuten sein. Bei Verletzung der Verdauung ändert sich nichts.

Bewertung der funktionellen Aktivität von Phagozyten durch die Reduktionsreaktion von Nitro-Tetrazol (NBT-Test)

Dieser Test ist ein Indikator für die bakterizide Funktion von Phagozyten und ermöglicht es Ihnen, deren Fähigkeit zum sauerstoffabhängigen Abtöten zu bewerten. Wenn dieser Abtötungsmechanismus aktiviert ist, wird das Enzym NADPH-Oxidase aktiviert, wodurch reaktive Sauerstoffspezies in Phagozyten auftreten. Die Freisetzung solcher Substanzen in der Zelle wird als Sauerstoffexplosion bezeichnet, die mit dem NBT-Test registriert werden kann. Bei der Formulierung dieses Tests wird die Substanz Nitrosiniumtetrazolium zu den Phagozyten gegeben, sie wird von der Zelle absorbiert und wandelt sich in Gegenwart reaktiver Sauerstoffspezies in eine dunkelblaue gefärbte Substanz Diformazan um. Je mehr dunkelblaue Körnchen auf der Oberfläche oder im Inneren des Phagozyten fixiert sind, desto mehr aktive Sauerstoffformen werden gebildet, desto mehr sauerstoffabhängiges Abtöten.

Der NBT-Test besteht aus zwei Versionen: spontan und induziert. Beim Aufbau eines spontanen NBT-Tests werden Phagozyten in Gegenwart von NST ohne vorherige Aktivierung der Zellen kultiviert, und bei Durchführung des induzierten NBT-Tests wird dem Kulturmedium ein Aktivator der Phagozytenreaktion zugesetzt. Die Einstellung des NBT-Tests in zwei Varianten ermöglicht die Berechnung der Funktionsreserve von Zellen, dh der Differenz zwischen der Anzahl (Intensität) induzierter Diformazan-positiver Zellen und der Anzahl (Intensität) spontaner Diformazan-positiver Zellen. Die Werte des induzierten NBT-Tests charakterisieren die Aktivität von Phagozytenzellen in Gegenwart eines antigenen Stimulus und werden als Kriterium für ihre Bereitschaft zur vollständigen Phagozytose angesehen. Der spontane NBT-Test ermöglicht die Abschätzung des Aktivierungsgrades sauerstoffabhängiger Abtötungsmechanismen nicht aktivierter Phagozyten. Es kennzeichnet den Aktivierungsgrad intrazellulärer mikrobizider Systeme.

Zur Bildung eines spontanen NBT-Tests werden 0,05 ml einer 0,2% igen Lösung von NBT in Kaliumphosphatpuffer (0,1, pH 7,3) und 0,05 ml desselben Puffers zu 0,1 ml Blut gegeben. Parallel dazu wird eine Probe platziert, um den induzierten NBT-Test zu berücksichtigen, bei dem anstelle von 0,05 ml Puffer das gleiche Volumen an Phagozytenaktivator zugesetzt wird (z. B. Pyrogen bei einer Konzentration von 50 & mgr; g / ml). Das Reaktionsgemisch wird in einem Wasserbad bei 37 ° C (30–60 min) thermostatisiert. Mitteldichte Abstriche werden hergestellt, an der Luft getrocknet und in Ethylalkohol oder Nikiforov-Mischung fixiert (20 min), dann mit einer wässrigen Lösung von Neutralrot (0,1%, 1 min) gestrichen.

Nach der Reaktion werden Blutausstriche unter Eintauchen mikroskopiert (100 × Linse, 10 × Okular). Unter 100 Zellen wird der Anteil der aktivierten Neutrophilen (DAN,%), die Diformazan-Granulate enthalten, gezählt. Entsprechend der Menge an Dipherformazan, die in den Zellen abgelagert ist, wird ihre Aktivität in willkürlichen Einheiten bewertet und der Neutrophilen-Aktivierungsindex (IAN, Used Units) wird berechnet:

wo ist HNeg. - die Anzahl der Zellen, die kein Diformazan-Granulat enthalten;

H1 - die Anzahl der Zellen, in denen die Fläche der Diformazan-Ablagerungen weniger als 1/3 der Kernfläche beträgt;

H2 - die Anzahl der Zellen, in denen die Ablagerungen von Diformazan von 1/3 bis zur gesamten Kerngröße reichen;

H3 - die Anzahl der Zellen, in denen Diformazan-Ablagerungen einen größeren Bereich des Kerns einnehmen.

Die Ableitung des Mobilisierungskoeffizienten (KM) erfolgt nach folgender Formel: