ELISA-Analyse - vom Screening auf HbsAg bis zur komplexen Diagnostik

Mit der Einführung moderner Technologien in der Medizin wachsen die Möglichkeiten immunochemischer Diagnoseverfahren, die die Krankheit schnell und genau erkennen, wenn andere Methoden ohnmächtig sind. Die Erkenntnis, dass das Hepatitis-B-Virus in einer sehr geringen Konzentration im Körper vorhanden sein kann, bei der es selbst mit einer so zuverlässigen Methode wie der PCR nicht nachgewiesen werden kann, macht es erforderlich, das Problem der Diagnose dieser Erkrankung neu zu betrachten und die Möglichkeiten eines Immunoassays zu schätzen.

In diesem Material werden wir detailliert alles analysieren, was mit dieser Art von Laborforschung zu tun hat. Sie erfahren, was ein Enzym-Immunoassay ist und wie er durchgeführt wird, was das australische Antigen ist und wie es bestimmt wird, was die unverständlichen Abkürzungen Hbs ag, Hbcor, bedeuten und welche Rolle sie dabei spielen, um die Analyse zu entschlüsseln. Außerdem erhalten Sie viele nützliche und interessante Informationen.

Inhalt des Artikels:

Allgemeine Informationen zu ELISA

ELISA (abgekürzt ELISA) ist eine labordiagnostische Methode, mit der sowohl Antigene als auch Antikörper aus einer Vielzahl von Infektionen, einschließlich Hepatitis B, erkannt werden können. Das aktuelle Wissen über die Eigenschaften des Virus und die Eigenschaften der körpereigenen Immunantwort ermöglicht nicht nur das Erkennen der Infektion, sondern auch deren Identifizierung Phase, Wirksamkeit der Impfung und Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung.

Die Essenz des Enzymimmunoassays

Der ELISA basiert auf der Antigen-Antikörper-Reaktion bzw. auf deren Eigenschaften.

Als Reaktion auf das Eindringen einer Fremdsubstanz (Antigen), bei der es sich insbesondere um Proteine ​​des Virus handelt, produziert der Körper schützende Proteine ​​- Antikörper. Antikörper gehen mit dem Antigen eine komplexe Reaktion ein und blockieren seine Aktivität.

Wir werden im Folgenden mehr über Antigene und Antikörper sprechen, aber jetzt werden wir feststellen, dass es für jedes Antigen streng individuelle, oder wie Ärzte sagen, homologe Antikörper gibt. Wenn wir also ein spezifisches Antigen im Blut nachweisen möchten, verwenden wir eine diagnostische Tablette mit Antikörpern. Wenn sich im Blut ein Antigen befindet, reagiert es mit Antikörpern, die auf verschiedene Weise nachgewiesen werden können. Umgekehrt. Wenn wir Antikörper finden wollen, brauchen wir eine Tablette mit dem entsprechenden Antigen.

In den meisten Fällen tragen die diagnostischen Werte nur die Antikörper, mit denen Sie fast jede Infektion diagnostizieren können. Die Besonderheit des Hepatitis-B-Virus besteht jedoch darin, dass die Hauptrolle bei der Diagnose von einem der Antigene - dem australischen Antigen - gespielt wird.

Wie ist die IFA?

Betrachten Sie ein typisches ELISA-Verfahren für ein bestimmtes Beispiel, wenn Sie Antikörper gegen den Erreger identifizieren möchten.

Zur Diagnostik wird eine Tablette mit 96 Wells verwendet, die mit dem entsprechenden Antigen vorgesättigt sind. Das Verfahren ist wie folgt:

Serum wird auf alle Zellen aufgetragen;

homologe Antikörper reagieren mit dem Antigen und heften sich an die Platte;

Tablette gewaschen, nicht gebundene Antikörper entfernt;

dann wird eine enzymatische Markierung in die Zellen eingeführt - eine Substanz, die mit Antikörpern reagiert und den Inhalt der Zelle färbt.

Dies ist das Standard-ELISA-Verfahren mit Anfärbung, das beispielsweise in immunochromatographischen Teststreifen verwendet wird.

ELISA ist nicht auf die qualitative Bestimmung von Antikörpern oder Antigenen des Erregers beschränkt. Je mehr Antikörper in den Zellen der Tablette enthalten sind, desto intensiver ist die gefärbte Lösung. Beim Vergleich seiner optischen Dichte mit der Kontrolle können moderne Geräte die Konzentration der Antikörper pro Volumeneinheit ziemlich genau berechnen. So wird ein quantitativer ELISA durchgeführt, dessen Messgröße meistens die Einheiten der optischen Dichte (EOP) sind.

Immunochemilumineszenz-Analyse

Heute gibt es mehrere Dutzend Arten von ELISA, von denen jede einen bevorzugten Bereich hat. Die populärste Diagnose bei der Hepatitis B ist die Immunochemilumineszenz-Analyse.

Die enzymatische Markierung für diese Analyse sind keine Chromatine wie beim Standard-ELISA, sondern spezielle Substanzen - Phosphore, die den Komplex dazu bringen, im ultravioletten Licht zu leuchten.

Mit Hilfe eines speziellen Geräts - dem Luminometer - können Sie den Emissionsgrad und damit die Konzentration der gewünschten Substanz genau bestimmen.

Mit Hilfe von ELISA-Methoden können nahezu alle vorhandenen Antigene des Hepatitis-B-Virus und Antikörper gegen diese bestimmt werden.

Hepatitis-B-Virus-Antigene: Hbs, Hbe und Hbc

Der Begriff Antigen (Antigen) stammt aus zwei englischen Wörtern: Antikörper - Antikörper und Generator - Hersteller. So kann unter dem Antigen jede Substanz verstanden werden, die im Körper die Bildung von Antikörpern bewirkt. Die häufigsten Antigene sind Proteinverbindungen.

Heute sind drei Antigene des Hepatitis-B-Virus bekannt: hbsag, hbc und hbe.

Australisches Antigen

Das Protein, das Teil der äußeren Hülle des Erregers Hepatitis B ist, wurde lange vor der Entdeckung des Virus selbst entdeckt. Dieses Antigen erhielt seinen Namen, weil es zuerst von den Ureinwohnern Australiens identifiziert wurde. Anfangs wurde das Protein jedoch nicht als Antigen betrachtet, sondern als völlig normales Blutelement unter den Eingeborenen, und das Bewusstsein für den Zusammenhang mit Lebererkrankungen kam etwas später.

Die Langzeitkonservierung des Antigens im Blut und das Fehlen von Antikörpern deuten auf die Möglichkeit der Bildung einer HBeAg-positiven chronischen Hepatitis B hin

In der Fachliteratur wird der Name "australisches Antigen" heute praktisch nicht gefunden und durch die internationale Abkürzung - HbsAg (Hepatitis-B-Oberflächenantigen) - Hepatitis-B-Oberflächenantigen - ersetzt. Außerdem können Sie die Abkürzungen hbs antigen oder nur hbs finden. Alle diese Abkürzungen sind akzeptabel und können durch Aufnahme von HBV oder HBV - dem Hepatitis-B-Virus (Hepatitis-B-Virus) - ergänzt werden.

Das Oberflächenantigen des Hepatitis-B-Virus weist eine bemerkenswerte Eigenschaft auf, die es zu einem unverzichtbaren diagnostischen Marker macht - seine Konzentration im Blut kann sehr hohe Werte erreichen, bis zu einem halben Milligramm pro Milliliter Blut. Dies liegt daran, dass nur ein kleiner Teil des neuen HBsAg, der während der Vermehrung des Hepatitis-B-Virus gebildet wird, zum Bau der Membranen neuer Viruspartikel verwendet wird und der Rest frei im Blut zirkuliert. Infolgedessen kann die Anzahl der hbs-Teilchen im Blut die Anzahl der Virionen Hunderttausende Male übersteigen.

Dieses Merkmal macht das australische Antigen zum Hauptmarker bei der Screening-Diagnose von Hepatitis B, die bereits 4-6 Wochen nach der Infektion im Blut gefunden wird. Bei der Bildung von Antikörpern wird das Oberflächenantigen allmählich durch sie ersetzt. Wenn HBsAg nach 6 Monaten persistiert, deutet dies auf den Übergang der Infektion zur chronischen Form hin.

Als es kürzlich möglich wurde, die Konzentration von hbs hbv zu bestimmen, ist seine Rolle bei der Diagnose sogar noch größer geworden, da die Abhängigkeit von Antigen die chronische Hepatitis B (HBV) von einem gesunden Trägerzustand unterscheiden und die Wirksamkeit der Behandlung überwachen kann.

Kernantigene

Im Kern des Virus - Nukleocapsid - befinden sich Proteine, die die Reproduktion des Virus HBcoreAg und HBeAg steuern.

HBcoreAg, das auch als HBCore-Antigen, hbc oder Core-Antigen bezeichnet werden kann, ist nur in den Lebergeweben, direkt in den Kernen von Hepatozyten, zu finden. Dieses Antigen wird nicht im Blut nachgewiesen und hat keinen diagnostischen Wert.

Die Struktur des Hepatitisvirus

HBeAg (HBe, HBprecoreAg) - spielt dagegen eine wichtige Rolle bei der Diagnose. HBeAg und HBcoreAg sind nahe Verwandte. Sie haben eine große Ähnlichkeit der Struktur und unterscheiden sich hauptsächlich in der räumlichen Position der Moleküle. Im Gegensatz zu HBcore ist HBe nicht Teil der Nucleocapsidwand und zirkuliert frei im Blut.

Die Rolle von HBe im Infektionsprozess ist noch nicht ausreichend klar, jedoch sind die Besonderheiten seines Verhaltens und ihre Beziehung zum Verlauf des Infektionsprozesses bereits ausreichend untersucht worden. HBeAg weist auf die aktive Reproduktion des Virus hin und ermöglicht die zuverlässige Bestimmung der Phase von chronischem CHB - HBeAg - positiv oder HBeAg - negativ.

HBe kann bereits in der Inkubationszeit des akuten Hepatitis-B-Virus (HBV) im Blut nachgewiesen werden, während eine hohe Konzentration von HBeAg für 3 Wochen höchstwahrscheinlich auf eine Gefahr eines chronischen Prozesses hinweist. Die Konzentration von HBe steht in direktem Zusammenhang mit dem Gehalt an Dane-Partikeln (sogenannte Hepatitis-B-Viruspartikel) - je höher die Menge an HBe ist, desto höher ist die Konzentration der HBV-DNA im Blut.

HBeAg ist ein wichtiger Marker für die Infektiosität der Krankheit. Das Blut von HBeAg-positiven Patienten ist viel ansteckender als HBeAg-negativ. Beispielsweise beträgt bei schwangeren Frauen, die für HBe und Hbs positiv sind, die Wahrscheinlichkeit einer Übertragung der Infektion auf das Kind 50%, während die Wahrscheinlichkeit eines solchen Ereignisses bei HBe-negativ ist, die Hbs einer positiven Mutter jedoch 10-30% beträgt.

Hbe bestimmt den Verlauf einer chronischen Hepatitis. Eine HBeAg-positive chronische Hepatitis B hat eine viel ungünstigere Prognose hinsichtlich der Entwicklung einer Zirrhose.

Das ist wahrscheinlich alles, was Sie über HBV-Antigene wissen müssen, und wir wenden uns der zweiten Gruppe von Hepatitis-B-Markern zu - den Antikörpern.

Essenz und Diagnose von Hepatitis B

Sobald sich die Bühne in Gelbsucht verwandelt, färben sich die Integumente und Schleimhäute gelb, der Gesundheitszustand verschlechtert sich stark. Es ist wichtig zu betonen, dass die Leber größer wird und unter dem Rippenbogen hervorsteht. Die Verfärbung der Haut in einem gelben Farbton erfolgt allmählich. Die Menge an Leberenzymen wächst im Blut und die Thymolprobe ändert sich nicht.

Diagnose der Krankheit: grundlegende Methoden und Konzepte

Die Diagnose der Hepatitis B wird auf verschiedene Weise durchgeführt:

1. Zunächst muss der Arzt eine Anamnese durchführen und die Person gründlich befragen. Bei der Umfrage wird besonderer Wert auf Momente gelegt:

• ob die Einführung von Drogen oder anderen intravenösen Mitteln;
• ob es Bluttransfusionen gab;
• ob chirurgische Eingriffe durchgeführt wurden;
• ob eine Schädigung der Hautintegrität vorliegt;
• Was sind die sexuellen Beziehungen?
• ob der Patient Kontakt mit dem Patienten mit Hepatitis B oder seinem Träger hatte.

Wenn eines dieser Elemente aufgetreten ist, wird angegeben, für wie lange. Typischerweise tritt eine Infektion bei Kontakten zwischen 6 Wochen und 6 Monaten vor den ersten Symptomen einer Hepatitis auf.

2. Labordiagnostik von Hepatitis B, ELISA-Analyse von Blut auf Antigene und Antikörper gegen Hepatitis B. Diese Art der Untersuchung dient der Identifizierung von 3 Antigenen:

• HBsAg (Antigen, oberflächlich gelegen),
• HBcAg (innen)
• HBeAg (mit dem vorherigen Antigen verbunden). Die Krankheit ist durch den frühzeitigen Nachweis dieser Antigene im Blut gekennzeichnet.

Menschen, die an Hepatitis B leiden und diese Antigene im Blut enthalten, sind sehr ansteckend. Sie können andere Menschen infizieren. Wenn HBsAg im menschlichen Blut nicht vorhanden ist, bedeutet dies, dass er gesund ist. Wenn eine Person krank ist, beginnt der Körper, Antikörper gegen vorhandene Antigene auszuscheiden.

3. Diagnose von Hepatitis B unter Verwendung einer PCR-Technik zum Nachweis von HBV-DNA im Kreislaufsystem. Wenn das Ergebnis positiv ist, hat die Person Hepatitis. Die Analyse der HBV-DNA wird als qualitativ bezeichnet. Es gibt auch eine quantitative PCR. Quantitative PCR bietet die Möglichkeit, die Belastung bei Vorhandensein des Hepatitis-Virus zu identifizieren. Was ist die Viruslast? Dies ist die Anzahl von Kopien von HBV-DNA in 1 ml Blut. Die quantitative Analyse der Hepatitis zeigt die Aktivität des Virus.

4. Blutuntersuchung auf Biochemie. Diese Analyse beinhaltet die Bestimmung der Anzahl der von der Leber produzierten Enzyme. Solche Enzyme umfassen ALT, AST. Sie befinden sich in den Leberzellen - Hepatozyten. Wenn Leberzellen geschädigt werden, werden die Enzyme freigesetzt und gelangen in das Blut. Eine positive Analyse wird nur berücksichtigt, wenn die Anzahl der Leberenzyme die Norm überschreitet. Die Umfrage zeigt, ob es entzündliche Prozesse in der Leber und deren Aktivität gibt.

5. Ultraschalluntersuchung, Elastometrie usw. Die Diagnose einer Hepatitis kann mit anderen Methoden als dem Labor durchgeführt werden. Mit Ultraschall werden die Bauchorgane untersucht. Ultraschall liefert ein klares Bild bei jedem entzündlichen Prozess der Leber und ihrer Gefäße. Effektive Durchführung der Elastometrie der Leber. Die Elastometrie-Methode gibt Aufschluss über den Fibrosegrad im Lebergewebe.

6. Die wichtigste Analyse stellt das Vorhandensein von Hepatitis-B-Antigenen in der roten Blutkörperchenmasse dar. Falls vorhanden, weist dies auf das Vorliegen einer Infektion im menschlichen Körper hin.

7. Der Labortyp der Hepatitis-Diagnose umfasst die Bestimmung von Antigenen und Antikörpern in der Erythrozytenmasse. Das häufigste HBsAg manifestiert sich auch in der Inkubationszeit der Hepatitis im Kreislaufsystem. Eine Person weiß nicht, wie sich ihre Krankheit entwickelt, und im Blut sind bereits Veränderungen im Gange. Bei akuter Hepatitis verschwindet HBsAg aus dem Blut. Normalerweise ist HBsAg im ersten Monat der Iterusperiode nicht vorhanden, und Antikörper gegen dieses Antigen beginnen sich 90 Tage nach der Infektion im Kreislaufsystem zu bilden.

Ein positiver Antikörpertest bedeutet nicht, dass eine Person Hepatitis hat. Es ist möglich, dass er zuvor eine Hepatitis ohne D-Agent hatte. Wenn sich nach der Behandlung kein HBsAg im Blut des Patienten befindet, aber Antikörper vorhanden sind, deutet dies auf eine gute Prognose hin, die auf eine Genesung des Patienten hindeutet. Wenn ein Patient an einer chronischen oder schweren Hepatitis leidet, können Antikörper bereits ab den ersten Tagen der Iterusperiode auftreten.

Das zuverlässige Äquivalent ist das Anti-HBc-IgM im Blut. Sie werden am Ende der präikterischen Periode offenbart. Sie sind die gesamte Zeit der offensichtlichen Manifestationen präsent. Wenn die Analyse Anti-HBc-IgM enthält, bedeutet dies, dass sich das Virus weiterhin vermehrt. Bei Beginn der Genesung verschwindet Anti-HBc-IgM. Die akute Phase der Krankheit kann einen Anti-HBc-IgG-Assay erzeugen. Sie werden während des gesamten Lebens einer Person entdeckt.

Wenn die Inkubationszeit der Hepatitis (vor allem Autoimmunerkrankung) abgeschlossen ist, erscheint HBeAg im Blut. Sie informieren über die aktive Teilung und Zunahme infektiöser Partikel. Sobald die ikterische Periode beginnt, verschwindet NVAAg. Es wird durch Anti-HBe ersetzt. Anti-HBe zeigt an, dass die Aktivität der Infektion reduziert ist und die Genesung bald eintritt. Aber die Reproduktion des Virus hört nicht auf!

Akute Hepatitis kann chronisch werden. Über diese wird im Blut H identifiedеАg gesprochen. Wenn es vorhanden ist, bedeutet dies, dass die Wahrscheinlichkeit einer Umwandlung des Prozesses in eine chronische Form hoch ist. Die Anwesenheit von HeVag weist auf einen hoch ansteckenden Patienten hin.

Es ist zu beachten, dass die Labordiagnose von Hepatitis B, die ein negatives Ergebnis für HBsAg ergibt, die Diagnose selbst nicht ausschließt. Ein wichtiges Element ist das Vorhandensein von Anti-HBc-IgM im Blut. Diese Antikörper bestätigen die Krankheit genau. Wenn der Bluttest kein Anti-HBc-IgM enthält, kann dies auf das Vorhandensein von HBV hinweisen, und das Vorhandensein dieser Antikörper zeigt eine Zunahme der Infektion an.

Hepatitis-B-DNA-Nachweis

Die wichtigste Studie zur Bestimmung der Anwesenheit von Virus-DNA ist die PCR. Die Analyse zeigt die Aktivität des Infektionsprozesses. Mit dieser Methode können Sie die Prognose der Krankheit lernen.

Wenn die Hepatitis günstiger ist, verschwindet die HBV-DNA während der anfänglichen Infektionsperioden aus dem Blut. Die Labordiagnostik in Form von PCR liefert Daten über die Qualität der Behandlung (die Wirkung eines bestimmten Arzneimittels).

Um zu verstehen, welche Taktiken für die Bestimmung therapeutischer Maßnahmen zu ergreifen sind, muss eine quantitative PCR-Methode durchgeführt werden. Quantitative PCR weist auf eine positive Reaktion der Therapie hin.

Grundlage für die Diagnose

Um eine geeignete Diagnose zu stellen, sind folgende Untersuchungen erforderlich:

1. Tägliche Inspektion, Palpation.
2. Ultraschall der Leber
3. Biochemische Analyse von Blut (wiederholt durchgeführt).
4. Untersuchung auf HBsAg, HBeAg, Anti-HBe, Anti-HBc-IgM, Anti-HBc-Gesamt, HBV-DNA.
5. Marker für HBV und HCV (Virushepatitis ist ausgeschlossen).
6. Leberpunktion.
7. Leberbiopsie. Mit Hilfe einer speziellen Nadel wird die Bauchdecke punktiert und ein kleines Stück Leber zur histologischen Untersuchung entnommen (das Stück hat eine Größe von nicht mehr als einem halben Gramm). Die Biopsie ist die neueste Testmethode für Hepatitis. Dank ihr können Sie sehr genau über den Aktivitätsgrad des Infektionsprozesses, die Leberfibrose, sprechen. Eine Biopsie ist ein chirurgischer Eingriff. Dies kann zu Komplikationen führen und wird daher häufig nicht zur Diagnose herangezogen.
8. Fibroelastographie. Damit kann die Dichte des Lebergewebes geschätzt werden. Die Technik ähnelt dem Ultraschall. Die Studie verwendet einen speziellen Sensor, der an der Stelle der Leberprojektion auf der Haut installiert wird.
9. Fibrotest Es basiert auf dem Zählen bestimmter Blutwerte.

Chronische Hepatitis B

Chronische Hepatitis B schreitet fort:

Phase 1 - Replikation des Virus. Das Virus vermehrt sich mit erhöhter Aktivität.

Phase 2 - Integration. Der Virus hört auf, sich zu vermehren. Das Virusgenom beginnt sich in die DNA der normalen Leberzellen, der Hepatozyten, zu integrieren.

Um die Geschwindigkeit des Fortschreitens des Virus zu bestimmen, ist es wichtig, die Schwere des Prozesses, das Ergebnis und den Grad der Zerstörung der Leberzellen zu verstehen. Die Labordiagnose einer chronischen Hepatitis basiert auf der Erkennung von:

Wenn eine Hepatitis HBeAg-positiv ist (positive Analyse), dann wird die Erythrozytenmasse wie folgt sein:

• im Zuchtstadium - HBsAg, HBeAg, Anti-HBc-IgM, Anti-HBc (insgesamt), HBV-DNA;
• im Stadium der Insertion von Hepatozyten in DNA - HBsAg, Anti-HBe, Anti-HBc (insgesamt), HBV-DNA.

Wenn die Hepatitis seronegativ ist, sind HBsAg, Anti-HBe, Anti-HBc-IgM, Anti-HBc, HBV-DNA in der Blutmasse vorhanden. Darüber hinaus hängt ihre Anwesenheit in keiner Weise vom Stadium des Infektionsprozesses ab.

Differentialdiagnose

Bei der Diagnosestellung ist der Arzt verpflichtet, Hepatitis B von anderen Krankheiten - Hepatitis A, C, E, D - zu unterscheiden. Die endgültige Diagnose kann nur gestellt werden, nachdem bestimmte Marker für jede Hepatitis in der Blutmasse identifiziert wurden.

Hepatitis sollte mit anderen wichtigen Krankheiten unterschieden werden: akute respiratorische Virusinfektionen, Gallensteine, Lebensmittelvergiftung, Darminfektionen, chirurgische Pathologie der Bauchorgane und viele andere Krankheiten.

Autoimmunhepatitis

Bei der Autoimmunhepatitis umfasst die Diagnose die folgenden wichtigsten Untersuchungen:

1. Analyse der Erythrozytenmasse (OAK). Erklärung: Anämie (Normozytose) im Blut wird bei Autoimmunhepatitis, einem verringerten Gehalt an Leukozyten, Blutplättchen und einem erhöhten ROE beobachtet. Es ist jedoch mit einer höheren Anämie zu rechnen.
2. Urin Entschlüsselung der Urinanalyse: Enthält Eiweiß, rote Blutkörperchen, Bilirubin.
3. Bluttest für die Biochemie. Sehr relevante Analyse. Interpretation: erhöhte Bilirubinmenge, erhöhte Arginase, Albuminabnahme, erhöhte γ-Globuline und Thymoltest. Der Sublimat-Test ist reduziert. Einige Indikatoren können um den Faktor 2 oder mehr erhöht werden. Dies ist ein positiver Test für Autoimmunhepatitis.
4. Immunologische Analyse Dekodierung: T-Lymphozyten-Suppressoren nehmen ab, Lupus-Zellen erscheinen in der Erythrozytenmasse, die Anzahl der Immunglobuline steigt, Antikörper gegen Erythrozyten.

Ein positiver Hepatitis-Test kann durch eine serologische Forschungsmethode nachgewiesen werden. Autoimmunhepatitis ist eine heterogene Krankheit.

ELISA für Virushepatitis

9. März 2017, 16:25 Expertenartikel: Nova Vladislavovna Izvochkova 0 3,608

Um virale Hepatitis im Körper nachzuweisen, verwendet die Medizin in großem Umfang einen Enzymimmunoassay, der auf dem Nachweis der Konzentration und des Antigentyps unter Verwendung von Antikörpern und Enzymen basiert. Es wird schrittweise durch Laboruntersuchungen mit hoher Genauigkeit der Indikationen durchgeführt. Je nach Menge und Klasse der Antikörper ändert sich die Farbe und Konzentration des Enzyms, das ELISA verwendet, und entsprechend diagnostiziert der Arzt die Krankheit.

Was ist ELISA?

Das Vorhandensein von Virushepatitis im Körper des Patienten wird unter Verwendung eines serologischen Blutanalyseverfahrens auf das Vorhandensein von HCV-Virus und darauf basierende Marker (Körper und Antikörper) bestimmt. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) untersucht verschiedene Viren, niedermolekulare Verbindungen, Makromoleküle, ihre qualitativen und quantitativen Indikatoren anhand der Manifestation der Reaktion auf ihre Antigene. Verwenden Sie dazu das Enzym als Markierung für die Signalregistrierung. Es wird zunehmend in der Medizin eingesetzt, da ELISA eindeutig definierte Antigene findet, ohne sie mit anderen zu verwechseln, und eine hohe Empfindlichkeit gegenüber einer Invasion bei Virushepatitis aufweist.

Der Nachteil einer solchen Diagnose ist die Unfähigkeit, die Ursache der Erkrankung zu identifizieren, da die Methode nur die Reaktion des körpereigenen Immunsystems anzeigt. Die Ergebnisse der Analyse werden durch die zuvor durchgeführte Impfung beeinflusst. Es wird empfohlen, 8 Stunden vor der Analyse auf das Essen, Nikotin und Alkohol zu verzichten. Grundlage des ELISA-Tests ist die enzymatische und körpereigene Reaktion des Körpers auf das Virus. Biologische Moleküle binden an die Zelle und ihre Elemente, Mikroorganismen, erkennen das Virus und arbeiten Enzyme, die es Ihnen ermöglichen, die Immunantwort in einem sichtbaren und messbaren Parameter darzustellen.

Indikationen zur Analyse

Virushepatitis im Körper kann Krebs und Leberzirrhose verursachen. Die Wichtigkeit einer rechtzeitigen Diagnose ist unbestritten. Die primäre Diagnosemethode ist der ELISA-Test, der mit hoher Genauigkeit das Vorhandensein des HCV-Virus (IgM und IgG) und die Aktivität seiner Spurenelemente bestimmt. Pflichttests für Virushepatitis bestanden:

1. Menschen mit Risikogruppen (Drogenabhängige, Menschen mit AIDS, Angestellte von medizinischen und Strafverfolgungsbehörden).
2. Menschen mit akuter oder chronischer Hepatitis.
3. Schwangere und Schwangerschaftsplanerinnen.

ELISA erkennt die Krankheit in jedem Stadium. Die Ergebnisse der Analyse liegen durchschnittlich innerhalb von 2 Tagen vor.

Kriterien, die die Wichtigkeit der Analyse bestimmen

ELISA-Test bestimmt das Vorhandensein von Antikörpern der Klasse IgG, IgM, IgA. Bei der Diagnose einer Virushepatitis achtet der Arzt nicht auf ihren Typ, da das Auftreten einer solchen Manifestation des HCV-Virus bereits ein akutes oder chronisches Stadium der Erkrankung anzeigt. In den frühen Stadien der Krankheit steigt der IgM-Spiegel (5 Tage nach der Infektion); am 15. - 20. Tag treten IgG-Antikörper auf und können auch nach der Heilung noch lange im menschlichen Blut verbleiben; IgA - erscheint nach 10-14 Tagen, nimmt nach der Behandlung ab.

Wenn IgG und IgA nach der Einnahme von Medikamenten nachgewiesen werden und ihr Spiegel gleich bleibt - der Träger hat eine chronische Form der Hepatitis. Ein wichtiges Kriterium des Tests ist eine klare Definition der Klasse der verfügbaren Antikörper und ihrer Menge. Auf dieser Grundlage können Sie nicht nur über das Vorhandensein der Krankheit, sondern auch über das Stadium ihrer Entwicklung Bescheid wissen. Die Erkennung solcher Elemente im Blut des Patienten ermöglicht es, die korrekte und rechtzeitige Behandlung vorzuschreiben, um ernstere Folgen zu vermeiden.

Wie wird es gemacht?

Direkten und nicht direkten ELISA-Test zuweisen. Stufen direkt:

1. Sammeln von biologischem Material und Platzieren in speziellen Löchern.
2. Innerhalb von 15-30 Minuten Antigene werden an die Oberfläche der Vertiefungen gebunden.
3. Hinzufügen von Antikörpern zu den Vertiefungen zum gefundenen Antigen. Alles für 1-5 Stunden.
4. Entfernen Sie nicht gebundene Antigene (gießen Sie den Inhalt der Wells).
5. Spülen Sie die Vertiefungen mit einer speziellen Lösung.
6. Fügen Sie den Wells Enzymlösung hinzu. 30 Minuten einwirken lassen - 1 Stunde.
7. Verwendung der Kolorimetrie (Erkennung der Farbe und Konzentration der Farbe der Vertiefung, Vergleich mit Indikatoren, die direkt proportional zur Konzentration des Virus sind).

Die Verwendung zur Diagnose eines indirekten ELISA führt zu genaueren Ergebnissen.

Die indirekte ELISA-Methode erfolgt unter Verwendung von nicht markierten Antikörpern gegen die gefundenen Antigene und der anschließenden Zugabe von markierten Antikörpern. Zuerst wird dem Patienten Blut entnommen und 15-30 Minuten lang durch die Vertiefungen verteilt. (Antikörper sind mit Löchern fixiert). Danach werden unmarkierte Antikörper für 1–5 Stunden in sie eingebracht (die Verbindung von Antikörpern mit Antigenen wird gebildet - der Immunkomplex). Als nächstes werden nicht gebundene Mikroelemente aus den Vertiefungen gegossen und mit einer speziellen Lösung gewaschen. Im nächsten Schritt fügt der Labortechniker 15 bis 30 Minuten lang markierte Spurenelemente in die Vertiefungen ein. (dieses bindet unmarkiert mit dem mit der Bildung des Komplexes markierten "Antikörper-Antikörper-Antigen"). Extra (lose) werden beim Ablassen und Waschen mit der Lösung wieder entfernt. Als nächstes ist das Enzym, das innerhalb von 5-30 Minuten seine Farbe ändert. Bleibt in den Bohrungen und Farbdaten werden mit den Daten der Tabellenindikatoren verglichen. Indirekter ELISA ist genauer.

Was zeigt ein ELISA bei Virushepatitis?

Durch den Immunoassay kann das Vorhandensein einer Infektion (Hepatitisviren aller Art, HIV, Herpes, Syphilis, Cytomegalovirus, Masern, Röteln, Mumps-Virus, Epstein-Barr-Virus) nachgewiesen werden, ein Marker für Autoimmunkrankheiten, Krebszellen. Weist auf Verletzungen der Fortpflanzungsfunktionen (Veränderungen von Testosteron, Prolaktin, Östradiol und Progesteron), Schilddrüsenfunktionsstörungen, Helminthenbefall, Chlamydien hin. Wirksam zum Nachweis von Ureaplasmose, Keuchhusten, Dange-Virus, West-Nil-Virus, Borrelien. Die Liste der Definitionen ist hoch und enthält viele Elemente.

Bestätigung der Ergebnisse

Die Bestimmung des HCV-Virusantigens mittels ELISA ergibt eine Genauigkeit von 98%. Es wird auch verwendet, um biologisches Material mit unscharfen vorherigen Indikatoren erneut zu testen. Das Vorhandensein von IgM-Antigenen ist kein Indikator für eine akute Hepatitis und erfordert zusätzliche Forschung. Wenn der ELISA-Test wiederholt wird, stimmen die Ergebnisse um 90–100% überein. Bei minimaler Diskrepanz wird der Durchschnittswert als Indikator verwendet. Für maximale Genauigkeit in Bezug auf Ärzte empfehlen, parallel eine biochemische Blutanalyse durchzuführen. Um die Ergebnisse nach dem Enzymimmunoassay zu testen, können Sie andere Diagnosemethoden verwenden.

Studien zum Hepatitis-B-Virus (ELISA und PCR)

Hepatitis-B-Virus-Antigen (HBsAg)

Hepatitis-B-Oberflächenantigen im Serum ist normalerweise nicht vorhanden.
Der Nachweis von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAg) im Serum bestätigt eine akute oder chronische Infektion mit dem Hepatitis-B-Virus.

Bei akuten Erkrankungen wird HBsAg in den letzten 1-2 Wochen der Inkubationszeit und den ersten 2-3 Wochen der klinischen Periode im Serum nachgewiesen. Die Durchblutung von HBsAg im Blut kann auf einige Tage begrenzt sein. Sie sollten sich daher um eine frühzeitige erste Untersuchung der Patienten bemühen. Die ELISA-Methode ermöglicht den Nachweis von HBsAg bei mehr als 90% der Patienten. Bei fast 5% der Patienten wird bei den empfindlichsten Forschungsmethoden kein HBsAg nachgewiesen. In solchen Fällen wird die Ätiologie der Virushepatitis B durch das Vorhandensein von Anti-HBcAg-JgM oder -PCR bestätigt.

Die HBsAg-Konzentration im Serum bei allen Hepatitis B-Schweregraden auf dem Höhepunkt der Erkrankung weist einen erheblichen Schwankungsbereich auf, jedoch gibt es ein bestimmtes Muster: In der akuten Periode besteht ein umgekehrter Zusammenhang zwischen der HBsAg-Konzentration im Serum und dem Schweregrad der Erkrankung.

Hohe Konzentrationen von HBsAg treten häufiger bei milden und mittelschweren Formen der Krankheit auf. Bei schweren und malignen Formen ist die Konzentration von HBsAg im Blut oft niedrig und bei 20% der Patienten mit schwerer Form und bei 30% mit einem malignen Antigen im Blut überhaupt nicht nachgewiesen. Das Auftreten auf diesem Hintergrund bei Patienten mit Antikörpern gegen HBsAg wird als ungünstiges diagnostisches Zeichen angesehen. es wird bei malignen Formen der Hepatitis B festgestellt.

Im akuten Verlauf der Hepatitis B nimmt die Konzentration von HBsAg im Blut allmählich ab, bis dieses Antigen vollständig verschwunden ist. HBsAg verschwindet bei den meisten Patienten innerhalb von 3 Monaten nach Beginn einer akuten Infektion.

Eine Abnahme der HBsAg-Konzentration um mehr als 50% am Ende der 3. Woche der akuten Periode weist in der Regel auf einen nahen Abschluss des Infektionsvorgangs hin. Bei Patienten mit einer hohen Konzentration an HBsAg in der Höhe der Erkrankung wird sie normalerweise für mehrere Monate im Blut nachgewiesen.
Bei Patienten mit niedrigen HBsAg-Konzentrationen verschwindet sie viel früher (manchmal mehrere Tage nach Beginn der Erkrankung). Im Allgemeinen liegt der Zeitpunkt der HBsAg-Erkennung zwischen mehreren Tagen und 4 bis 5 Monaten. Die maximale Erfassungsdauer von HBsAg mit einem glatten Verlauf der akuten Hepatitis B überschreitet 6 Monate ab dem Beginn der Krankheit nicht.

HBsAg kann bei gesunden Menschen in der Regel in prophylaktischen oder zufälligen Studien gefunden werden. In solchen Fällen werden andere Marker für virale Hepatitis B, Anti-HBcAg-JgM, Anti-HBcAg-JgG, Anti-HBeAg und die Leberfunktion untersucht.

Bei negativen Ergebnissen sind wiederholte Studien zu HBsAg erforderlich.
Wenn wiederholte Blutuntersuchungen für mehr als 3 Monate HBsAg ergeben, wird dieser Patient als chronischer Patient mit Virushepatitis B eingestuft.
Die Anwesenheit von HBsAg ist ziemlich üblich. Es gibt mehr als 300 Millionen Fluggesellschaften in der Welt und in unserem Land gibt es etwa 10 Millionen Fluggesellschaften.
Die Beendigung des HBsAg-Kreislaufs mit nachfolgender Serokonversion (Bildung von Anti-HBs) zeigt immer eine Erholung - Sanierung des Körpers an.

Ein Bluttest auf HBsAg wird für folgende Zwecke verwendet:

zur Diagnose einer akuten Hepatitis B:

• Inkubationszeit;
• akute Krankheit;
• frühe Genesung;
  

zur Diagnose einer chronischen Virushepatitis B;

bei Krankheiten:

• persistierende chronische Hepatitis;
• Leberzirrhose;

zum Screening und zur Identifizierung von Patienten in Risikogruppen:

Patienten mit häufigen Hämotransfusionen;

Patienten mit chronischem Nierenversagen;

Patienten mit multipler Hämodialyse;

Patienten mit Immunschwäche, einschließlich AIDS.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Die Ergebnisse der Studie werden qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis zeigt das Fehlen von Serum-HBsAg an. Ein positives Ergebnis - die Identifizierung von HBsAg weist auf eine Inkubation oder akute Periode einer akuten Virushepatitis B sowie auf eine chronische Virushepatitis B hin.

Antikörper gegen das nukleare Antigen des Hepatitis-B-Virus JgG (Anti-HBcAg JgG)

Normalerweise fehlt Serum Anti-HBcAg im Serum.
Bei Patienten mit Anti-HBcAg tritt JgG in der akuten Phase der Virushepatitis B auf und bleibt während des gesamten Lebens bestehen. Anti-HBcAg JgG ist der führende Marker für übertragenes HBV.

Blutuntersuchungen auf Anti-HBcAg JgG werden durchgeführt, um Folgendes zu diagnostizieren:

chronische Virushepatitis B in Gegenwart von HBs-Antigen im Serum;

Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis weist auf das Fehlen von Serum-Anti-HBcAg-JgG hin. Ein positives Ergebnis - die Identifizierung von Anti-HBcAg-JgG weist auf eine akute Infektion, eine Rekonvaleszenz oder eine zuvor übertragene Virushepatitis B hin.

Hepatitis-B-Virus "e" -Antigen (HBeAg)

Normalerweise fehlt HBeAg im Serum.
HBeAg kann im Serum der meisten Patienten mit akuter Virushepatitis B gefunden werden. Es verschwindet normalerweise vor dem HBs-Antigen im Blut. Ein hoher HBeAg-Spiegel in den ersten Wochen der Erkrankung oder ein Nachweis über mehr als 8 Wochen gibt Anlass zu einer chronischen Infektion.

Dieses Antigen wird häufig bei chronisch aktiver Hepatitis viraler Ätiologie nachgewiesen. Von besonderem Interesse bei der Definition von HBeAg ist die Tatsache, dass seine Detektion die aktive replikative Phase des Infektionsprozesses charakterisiert. Es wurde festgestellt, dass hohe HBeAg-Konzentrationen einer hohen DNA-Polymerase-Aktivität entsprechen und die aktive Replikation des Virus kennzeichnen.

Die Anwesenheit von HBeAg im Blut zeigt seine hohe Infektiosität an, d. H. das Vorhandensein einer aktiven Hepatitis-B-Infektion im untersuchten Körper und wird nur in Gegenwart von HBs-Antigen im Blut nachgewiesen. Bei Patienten mit chronischer aktiver Hepatitis werden antivirale Medikamente nur verwendet, wenn HBeAg im Blut nachgewiesen wird. HBeAg - Antigen - ein Marker für die akute Phase und die Replikation des Hepatitis-B-Virus.

Bei einem Bluttest auf HBe-Antigen wird Folgendes diagnostiziert:

Inkubationszeit der Virushepatitis B;

Prodromalperiode der Virushepatitis B;

akute Periode der viralen Hepatitis B;

chronische persistierende Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis zeigt das Fehlen von Serum-HBeAg an. Ein positives Ergebnis - der Nachweis von HBeAg weist auf eine Inkubation oder akute Periode einer akuten Virushepatitis B oder auf die fortgesetzte Replikation des Virus und die Infektiosität des Patienten hin.

Antikörper gegen das Antigen "e" des Hepatitis-B-Virus (Anti-HBeAg)

Anti-HBeAg im Serum ist normalerweise nicht vorhanden. Das Auftreten von Anti-HBeAg-Antikörpern weist in der Regel auf eine intensive Entfernung des Hepatitis-B-Virus aus dem Körper und eine geringfügige Infektion des Patienten hin.

Diese Antikörper treten in der Akutphase auf und bleiben bis zu 5 Jahre nach der Infektion bestehen. Bei chronisch-persistierender Hepatitis wird Anti-HBeAg zusammen mit HBsAg im Blut des Patienten gefunden. Serokonversion, d.h. der Übergang von HBeAg zu Anti-HBeAg bei chronisch aktiver Hepatitis ist zwar häufig prognostisch günstiger, aber dieselbe Serokonversion verbessert die Prognose einer schweren Leberzirrhotentransformation nicht.

Bei der Diagnose einer Virushepatitis B werden in folgenden Fällen Blutuntersuchungen auf Anti-HBeAg durchgeführt:

Feststellung des Anfangsstadiums der Krankheit;

akute Infektion;

frühe Genesung;

Genesung;

Erholung im späten Stadium.

Diagnose der kürzlich übertragenen Virushepatitis B;

Diagnose einer chronischen persistierenden Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis weist auf das Fehlen von Antikörpern gegen HBeAg im Serum hin. Ein positives Ergebnis ist der Nachweis von Antikörpern gegen HBeAg, die auf das Anfangsstadium der akuten Virushepatitis B, die akute Infektionsperiode, das frühe Stadium der Genesung, der Genesung, der kürzlich übertragenen Virushepatitis B oder der persistenten Virushepatitis B hindeuten können.

Die Kriterien für das Vorliegen einer chronischen Hepatitis B sind:

Nachweisen oder periodischer Nachweis von HBV-DNA im Blut;

kontinuierliche oder periodische Erhöhung der Aktivität von ALT / AST im Blut;

morphologische Anzeichen einer chronischen Hepatitis bei der histologischen Untersuchung der Leberbiopsie.

Nachweis des Hepatitis-B-Virus mittels PCR (qualitativ)

Das Hepatitis-B-Virus im Blut fehlt normalerweise.
Die qualitative Bestimmung des Hepatitis-B-Virus durch die PCR-Methode im Blut ermöglicht es, das Vorhandensein des Virus im Körper des Patienten zu bestätigen und damit die Ätiologie der Krankheit festzulegen.

Diese Studie liefert nützliche Informationen für die Diagnose einer akuten Virushepatitis B in den Inkubations- und frühen Entwicklungsstadien der Krankheit, wenn die wichtigsten serologischen Marker des Patienten im Blut fehlen. Serumvirale DNA wird bei 50% der Patienten in Abwesenheit von HBeAg nachgewiesen. Die analytische Empfindlichkeit der PCR-Methode beträgt nicht weniger als 80 Viruspartikel in 5 μl, die letzte DNA-Nachweisprobe, Spezifität - 98%.

Diese Methode ist wichtig für die Diagnose und Überwachung des Verlaufs von chronischem HBV. Etwa 5-10% der Fälle von Zirrhose und anderen chronischen Lebererkrankungen werden durch einen chronischen Träger des Hepatitis-B-Virus verursacht.Marker für die Aktivität solcher Erkrankungen sind das Vorhandensein von HBeAg und DNA des Hepatitis-B-Virus im Blut.

Die PCR-Methode ermöglicht es, die DNA des Hepatitis-B-Virus sowohl qualitativ als auch quantitativ im Blut zu bestimmen. Das bestimmte Fragment ist in beiden Fällen die eindeutige DNA-Sequenz des Gens des Strukturproteins des Hepatitis-B-Virus.

Der Nachweis von Hepatitis-B-Virus-DNA in Biomaterial mittels PCR ist erforderlich für:

Auflösung fragwürdiger serologischer Testergebnisse;

Erkennung des akuten Stadiums der Krankheit im Vergleich zu einer früheren Infektion oder einem früheren Kontakt;

die Wirksamkeit der antiviralen Behandlung kontrollieren.

Das Verschwinden der Hepatitis-B-DNA aus Blut ist ein Zeichen für die Wirksamkeit der Therapie

Nachweis des Hepatitis-B-Virus mittels PCR (quantitativ)

Diese Methode liefert wichtige Informationen über die Intensität der Krankheitsentwicklung, die Wirksamkeit der Behandlung und die Entwicklung von Resistenzen gegen aktive Wirkstoffe.
Für die Diagnose einer Virushepatitis mittels PCR in Serum werden Testsysteme verwendet, deren Empfindlichkeit 50-100 Kopien in einer Probe beträgt, was es ermöglicht, das Virus in einer Konzentration von 5 · 10 ^ 3 - 10 ^ 4 Kopien / ml nachzuweisen. Die PCR bei der Virushepatitis B ist auf jeden Fall für die Beurteilung der Virusreplikation notwendig.

Serumvirale DNA wird bei 50% der Patienten in Abwesenheit von HBeAg nachgewiesen. Blutserum, Lymphozyten und Hepatobiopsie können als Material zum Nachweis der DNA des Hepatitis-B-Virus dienen.

• Die Virämie wird wie folgt bewertet:
• weniger als 2.10 5 Kopien / ml (weniger als 2.10 5 IE / ml) - niedrige Virämie;
• 2.10 5 Kopien / ml (2.10 5 IE / ml) bis 2.10 6 Kopien / ml (8.10 5 IE / ml) - mittlere Virämie;
• mehr als 2,10 ^ 6 Kopien / ml - hohe Virämie.

Es besteht ein Zusammenhang zwischen dem Ergebnis einer akuten Virushepatitis B und der Konzentration von HBV-DNA im Blut eines Patienten. Bei einem niedrigen Virämiepegel ist der Verlauf der Chronisierung der Infektion nahe null, bei einem Durchschnitt ist der Prozess bei 25 bis 30% der Patienten chronisch, und bei einem hohen Virämiepegel wird akute Virushepatitis B häufig chronisch.

Die Indikationen für die Behandlung von chronischem HBV-Interferon-alpha sollten als Vorhandensein von Markern für eine aktive Virusreplikation betrachtet werden (Nachweis von HBV-HBV-, HBeAg- und HBV-DNA im Blutserum während der vorangegangenen 6 Monate).

Die Kriterien für die Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung sind das Verschwinden der HBEAg- und HBV-DNA im Blut, die normalerweise mit einer Normalisierung der Transaminase-Spiegel und einer langfristigen Remission der Krankheit einhergeht. Bei 80% der Patienten verschwindet die HBV-DNA im 5. Monat der Behandlung aus dem Blut. Die Verringerung des Virämiepegels um 85% oder mehr am dritten Tag nach Behandlungsbeginn im Vergleich zum Ausgangswert ist ein schnelles und ziemlich genaues Kriterium für die Vorhersage der Wirksamkeit der Therapie.

Erforschung der Virushepatitis nach der Methode des ife

ELISA bei der Diagnose einer Virushepatitis. Enzymimmunoassay-Fähigkeiten

Die spezifische Labordiagnostik der Virushepatitis beruht auf dem Einsatz immunochemischer und molekularbiologischer Forschungsmethoden. Die wichtigsten immunochemischen Methoden sind Radioisotop oder Radioimmune (RIA) und Immunoassay (ELISA). Immunochemische Diagnoseverfahren basieren auf der spezifischen Interaktion eines Antigens - eines Antikörpers mit nachfolgender Identifizierung des Komplexes mit Hilfe spezieller Markierungen. Der häufigste Enzymimmunoassay.

Die ersten Berichte über die Verwendung des Enzymimmunoassays. als Methode zur Bestimmung von Substanzen wurden 1971 gleichzeitig von zwei Forschungsgruppen veröffentlicht: V. Van Weemen, A. Schuurs und E. Engvall, P. Perlmann. Der Enzymimmunoassay basiert auf dem folgenden Prinzip: An der Festphase, die hauptsächlich die Oberfläche der Vertiefungen einer Polystyrol-Tablette verwendet, wird das Antigen des Infektionserregers oder Antikörpers (oft eine Mischung aus Antikörpern) an nachzuweisenden Antigenen fixiert. Dieses Antigen oder Antikörper, die an der Festphase fixiert sind, werden als Immunosorbens bezeichnet.

Durch die Inkubation des Immunosorbens und des Testserums in Gegenwart eines nachweisbaren Mittels werden sie an den Antigen - Antikörper - Komplex gebunden. Nach dem Waschvorgang, bei dem ungebundene Antigene und Antikörper entfernt werden, wird die Inkubation mit dem Konjugat durchgeführt. Als Konjugat zum Nachweis von HBsAg werden Anti-HBs verwendet: beim Nachweis von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus - Antikörper gegen humane Immunglobuline (Antivirus-Konjugat), die mit Meerrettichperoxidase markiert sind. Durch diese Inkubation erfolgt die Anbindung an die bereits vorhandenen Antigenkomplexe - den Antikörper des zusätzlich eingeführten Konjugats. Nach dem Entfernen von ungebundenem Konjugat (Waschen) wird das Substrat in die Vertiefungen eingeführt. Bei Verwendung eines Peroxidasekonjugats wird Wasserstoffperoxid als Substrat in Kombination mit einem Indikator verwendet, der am häufigsten als Orthophenylendiamin (OPD) oder Tetramethylbenzidin (TMB) verwendet wird. Das Ergebnis wird photometrisch geschätzt.

Die Qualität und Zuverlässigkeit der analytischen Fähigkeiten des Enzym-Immunoassay-Verfahrens zeichnen sich durch eine Reihe von Kriterien aus, zu denen die Empfindlichkeit, Spezifität, Genauigkeit und Reproduzierbarkeit zählen.

Die Empfindlichkeit ist die Mindestmenge einer Substanz, die durch einen Enzymimmunoassay nachgewiesen werden kann. Untergrenze der Empfindlichkeit dieser Methode ist in diesem Fall die Konzentration der Testsubstanz in der Probe, die dem kleinsten positiven Ergebnis der Bestimmung entspricht, die sich statistisch signifikant von den Indikatoren absichtlich negativer Proben unterscheidet. Die Empfindlichkeit eines IFTS hängt von einer Reihe von Umständen ab, die sich sowohl auf das Design des Testsystems (Affinität des Immunosorbens, die Qualität der Extraktions- und Puffersysteme) als auch auf die Auflösung und Genauigkeit der Registrierungsmethode beziehen.

Spezifität - die Fähigkeit, genau die Komponenten zu identifizieren, für deren Bestimmung dieser Enzymimmunoassay entworfen wurde. Die Spezifität des ELISA wird weitgehend durch die Kreuzreaktion von Antikörpern oder Antigenen (d. H. Der als Immunosorbens verwendeten Zusammensetzung) mit eng verwandten Verbindungen sowie der Zusammensetzung des Inkubationsmediums (Matrixeffekt) bestimmt.

Korrektheit - die Übereinstimmung des Durchschnittswertes der Ergebnisse wiederholter Bestimmungen derselben Kontrollprobe mit dem wahren Wert des gemessenen Parameters. Die Genauigkeit der Bestimmung im ELISA hängt von der Qualität des Testsystems und der Kontrollprobe ab. Für gute Immunoassay-Testsysteme liegen die Richtigkeitsindikatoren im Bereich von 90-110%. Die Besonderheit der biomedizinischen Forschung im ELISA ist die Unmöglichkeit, den genauen Wert zu bestimmen. Daher wird der Durchschnitt mehrerer Expertenlabors als der wahre Wert angesehen. Das statistische Kriterium für die Richtigkeit ist der arithmetische Mittelwert und der Grad seiner Abweichung vom wahren Wert, ausgedrückt in Prozent.

Reproduzierbarkeit - die Fähigkeit des Testsystems, bei wiederholten Studien derselben Probe dieselben Werte anzuzeigen. Die Reproduzierbarkeit hängt sowohl von zufälligen Fehlern (Fehlern) während des Einstellens der Reaktion als auch von der Qualität der Testsysteme und der Genauigkeit der Methode der Ergebnisaufzeichnung ab. Es wird davon ausgegangen, dass die Reproduzierbarkeit der gleichen Kontrollproben desselben Unternehmens in verschiedenen Laboratorien den Wert des Variationskoeffizienten von 15% nicht überschreiten sollte.

Es gibt mehrere spezifische ELISA-Schemata zur Bestimmung von Virushepatitis-Markern: a) direkter Enzymimmunoassay; b) indirekter Enzymimmunoassay; c) kompetitive Hemmung; c) "trap" oder "capture" -Methode.

Von den molekularbiologischen Methoden zur Diagnose von Virushepatitis werden häufiger Polymerase-Kettenreaktionen und Hybridisierungen eingesetzt. Diese Verfahren, insbesondere die PCR, ermöglichen es, sehr kleine Mengen spezifischer viraler DNA oder RNA zu detektieren und somit die Replikation und in einigen Fällen die Replikationsaktivität zu beurteilen.

Hepatitis-C-Bluttest

Hepatitis C ist eine der häufigsten Lebererkrankungen, die auftritt, wenn sie mit dem Hepatitis-C-Virus (HCV) infiziert wird, das hauptsächlich in den Körper gelangt, wenn es mit dem Blut einer infizierten Person in Kontakt kommt. Chronische und akute Hepatitis C. Bei 70-80 Prozent der Patienten mit akuter Hepatitis C treten keine Symptome der Krankheit auf, nur in einigen Fällen nach einer Infektion kommt es zu Manifestationen der Krankheit, die sich in Müdigkeit, Bauchschmerzen, Appetitlosigkeit, Verdunkelung äußern Urin, Erbrechen, Übelkeit, Aufhellung von Kot, Gelbsucht, Gelenkschmerzen. In der Regel treten die Symptome 6-7 Wochen nach der Infektion auf, die Dauer des Beginns der Anzeichen der Krankheit variiert jedoch zwischen 2 Wochen und sechs Monaten. Wenn die oben genannten Symptome auftreten, müssen Sie einen Arzt für Infektionskrankheiten konsultieren und einen Bluttest auf Hepatitis C durchführen lassen. Die rechtzeitige Diagnose der Hepatitis kann die Erkrankung im Frühstadium erkennen und die Heilungschancen erheblich erhöhen.

Wenn ein Hepatitis-C-Test geplant ist

Situationen, in denen ein Hepatitis-C-Test erforderlich ist:

• während der Schwangerschaft und Familienplanung;
• Patienten mit Symptomen einer chronischen oder akuten Hepatitis;
• Die Person ist gefährdet. Dies sind Angehörige des medizinischen Personals, Personen im Gefängnis, Polizeibeamte, Drogenabhängige, viele Sexualpartner, AIDS, Hämodialyse und andere.

Vorbereitung für die Hepatitis-C-Analyse

Eine spezielle Vorbereitung für die Analyse von Hepatitis C ist nicht erforderlich. Zur Analyse wird auf leerem Magen Blut aus einer Vene entnommen, gleichzeitig sollten nach der letzten Mahlzeit mindestens acht Stunden vergehen.

Hepatitis-C-ELISA-Assays

Die erste Analyse wird in der Regel zur Diagnose des Hepatitis C - ELISA - Tests (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) vorgeschrieben. Hepatitis-C-ELISA-Assays ermöglichen den Nachweis von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus (Anti-HCVAb) im Blut. Wenn das Ergebnis des ELISA-Tests positiv ist, zeigt dies den Kontakt des Körpers mit dem Hepatitis-C-Virus an, aber 40% der Personen, die einen positiven ELISA-Test haben, erkennen das Virus nicht im Blut. Dieses Phänomen wird als falsch positives Ergebnis bezeichnet. Mit Hilfe von ELISA wird auch das Spenderblut überprüft.

RIBA für Hepatitis C

Die RIBA-Analyse für Hepatitis C wird verwendet, um ein positives ELISA-Ergebnis zu bestätigen. Das rekombinante Immunoblotting-Verfahren (RIBA) ist eine genauere Untersuchung des Vorhandenseins von Antikörpern gegen das Hepatitis-C-Virus. Das Vorhandensein des Hepatitis-C-Virus im Körper bestimmt ebenfalls kein positives Ergebnis, sondern bestätigt nur das Vorhandensein von Antikörpern.

Hepatitis-C-PCR-Tests

Um das Vorhandensein von Hepatitis-C-Viren im Blut (HCV-RNA) nachzuweisen und eine Diagnose zu stellen, verwenden sie am häufigsten die Analyse mit der Methode der Polymerase-Kettenreaktion (PCR). Diese Studie ermöglicht es, das Vorhandensein einer geringen Menge des Virus im Blut mit hoher Genauigkeit festzustellen. Die PCR-Analyse für Hepatitis C kann bereits 5 Tage nach der Infektion, lange vor dem Auftreten von Antikörpern, ein Virus aufdecken. Wenn das Ergebnis der PCR-Analyse positiv ist, bedeutet dies das Vorhandensein einer aktiven Infektion.

Es gibt solche Variationen der PCR-Analyse:

• quantitative PCR, mit der nicht nur das Vorhandensein des Virus, sondern auch die Viruslast (Virusmenge) bestimmt werden kann. Dieser Indikator ist von großer Bedeutung für die Bestimmung der Wirksamkeit der Behandlung.
• Genotypisierung, die den Genotyp des Hepatitis-C-Virus festlegt, was für die Bestimmung der Dauer und der Taktik der Behandlung wichtig ist. Es gibt mehr als 10 Genotypen des Hepatitis-C-Virus, für die klinische Praxis reicht es jedoch aus, fünf der häufigsten Typen zu definieren: 1a, 1b, 2,3a / 3b.

Quantitative PCR-Analyse wird durchgeführt:

• mit einem qualitativen positiven Test auf das Vorhandensein von Hepatitis-C-Virus-RNA im Serum;
• für eine genaue Beurteilung der Wirksamkeit der Behandlung;
• die Taktik der Behandlung des Patienten zu bestimmen.

Es gibt keinen direkten Zusammenhang zwischen dem Schweregrad der Hepatitis C und der Virusmenge im Blut. Die Konzentration des Virus beeinflusst die Infektiosität der Krankheit, dh je größer die Virusmenge im Blut des Patienten ist, desto größer ist das Risiko einer Übertragung des Virus, beispielsweise durch sexuellen Kontakt oder von Mutter zu Kind. Die Wirksamkeit der Behandlung hängt auch von der Konzentration des Virus ab. Während der Therapie ist ein günstiger Faktor eine niedrige Viruslast, und ein sehr hoher ist ungünstig.

Die Analyse der Genotypisierung wird durchgeführt:

• mit einem qualitativen positiven Test auf das Vorhandensein von Hepatitis-C-Virus-RNA im Serum;
• für eine genaue Beurteilung der Wirksamkeit der Behandlung;
• die Taktik der Behandlung des Patienten zu bestimmen;
• die Chronisierung des Infektionsprozesses vorherzusagen;
• um das Fortschreiten der Krankheit festzustellen.

Der Nachweis des Genotyps des Virus ist für die Bestimmung der Behandlungsdauer von großer Bedeutung, was wichtig ist, da Interferon eine große Bandbreite an Nebenwirkungen und eine geringe Patiententoleranz aufweist.

Dekodierungsanalyse für Hepatitis C

Normalerweise fehlen Virus-RNA, Antikörper und Antigene vollständig. Das Vorhandensein von Antikörpern im Blut zeigt das Vorliegen einer chronischen oder akuten Hepatitis C oder die Erholungsphase an. Wenn HCV-RNA im Blut vorhanden ist, was durch PCR-Analyse bestimmt wird, weist dies auf das Vorhandensein eines Virus im Blut hin.

Bei einer falschen Testmethode, Transport und Blutabnormalitäten kann die PCR-Analyse manchmal falsch positive Ergebnisse zeigen. Analysen von ELISA und RIBA im Frühstadium der Krankheit, wenn der Körper noch keine ausreichende Menge an Antikörpern produziert hat, können ein falsch negatives Ergebnis zeigen.

Wenn beim Entschlüsseln des Hepatitis-C-Tests positive Ergebnisse erzielt werden, müssen Sie sich mit einem Infektionsarzt und einem Gastroenterologen für weitere Diagnosen und Behandlungen in Verbindung setzen.

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Diagnose der Hepatitis

Man kann das Vorhandensein von Hepatitis im Körper nicht sofort feststellen, da die Inkubationszeit der Krankheit bis zu vier Wochen dauern kann. Wenn die ersten Anzeichen der Krankheit auftreten, treten im betroffenen Organismus radikale Veränderungen in der Zusammensetzung des Blutes auf: Eine biochemische Analyse berichtet über ein schwerwiegendes Gesundheitsproblem und das Vorhandensein eines pathogenen Virus. Um eine endgültige Diagnose zu stellen, reicht es jedoch nicht aus, Blut für Hepatitis sowie eine detaillierte Diagnose von Hepatitis zu spenden.

Labordiagnostik der Hepatitis

Es ist wünschenswert, es nach dem Ende der Inkubationszeit durchzuführen, damit der Arzt mit höchster Präzision die im Körper vorhandene Lebererkrankung feststellen kann. Andernfalls führt die verordnete Behandlung nicht zum gewünschten therapeutischen Effekt und verschlimmert sogar das vorherrschende klinische Bild.

Diagnose von Hepatitis A

Typischerweise beginnt die Diagnose einer Hepatitis A mit einer detaillierten Befragung des Patienten und der Bestimmung einer Anzahl von Tests, die so schnell wie möglich durchgeführt werden müssen. Das:

• biochemischer Bluttest;
• vollständiges Blutbild;
• PCR-Methode;
• ELISA;
• Koagulogramm.

Wenn die Botkin-Krankheit fortschreitet, wird nach den Ergebnissen der biochemischen Blutanalyse ein anormaler Sprung von Bilirubin-, AlAT- und AsAT-Thymolproben beobachtet. Darüber hinaus werden spezifische Anti-HAV-IgM produziert, die eine unwiderlegbare Tatsache für das Vorhandensein von Hepatitis A sind.
Im Allgemeinen wird die Analyse des Blutes durch den Rückgang der Leukozyten, den Sprung in der ESR und die Lymphozytose bestimmt. Am zuverlässigsten ist jedoch die PCR-Methode, die den Indikator für die RNA des pathogenen Virus bestimmt.
Zusätzlich untersucht der Arzt die Symptome der Krankheit, woraufhin er eine endgültige Diagnose stellen und zur effektivsten Therapie durchbrechen kann. Die Notwendigkeit einer instrumentellen Untersuchung ist äußerst selten. Nach erfolgreicher konservativer Behandlung unter den Bedingungen des Krankenhausaufenthaltes und der Quarantäne des Patienten steht eine endgültige Genesung bevor und Hepatitis A tritt nicht wieder auf.

Diagnose von Hepatitis B

Um das Vorhandensein des Hepatitis-B-Virus zu bestimmen, ist nach den Ergebnissen der Labortests auch möglich, und dazu ist zunächst das Spenden von Blut bei Hepatitis erforderlich. Das pathogene Virus hat von Natur aus drei Hauptantigene - HBsAg, HBcAg und HBeAg, gegen die Antikörper im Körper produziert werden. Das Hauptmerkmal dieses Krankheitsbildes ist der ELISA - ELISA, der nur bestimmte Marker für Hepatitis B zeigt.
Sofort sollte geklärt werden, dass das Antigen HBsAg bereits vor den ersten Symptomen einer Hepatitis im Blut erscheint und in der Ikterik zuverlässig bestimmt wird. Ein negativer Test schließt jedoch das Vorhandensein von Hepatitis B nicht aus und erfordert daher die Verwendung einer gleichermaßen wirksamen Polymerase-Kettenreaktion (PCR).
Wenn Sie vermuten, dass Hepatitis B obligatorisch ist, handelt es sich um einen biochemischen Bluttest, der empfohlen wird, an erster Stelle zu bestehen. Die Durchführung einer Biopsie der Leber und des Ultraschalls der Peritonealorgane wird individuell besprochen. Wenn jedoch die Vorgeschichte der Erkrankung sehr klar ist, sind keine klinischen Untersuchungsmethoden erforderlich.

Leber-Echogramm bei Autoimmunhepatitis im Stadium der chronischen Hepatitis

Diagnose von Hepatitis C

Um diese Diagnose zu stellen, reicht es nicht aus, Blut für Hepatitis zu spenden, da das Virus in latenter Form im Körper vorkommen kann. Die wichtigsten Labortests sind jedoch alle oben dargestellten Analysen sowie die zusätzliche Leistung einer Leberbiopsie. Diese mikroskopische Untersuchung von biologischem Material (in unserem Fall ein Stück Lebergewebe) bestimmt das Ausmaß des pathologischen Prozesses und der Gewebefibrose. Die Materialprobenahme erfolgt unter örtlicher Betäubung, Komplikationen eines solchen Verfahrens sind in der medizinischen Praxis äußerst selten.
Bei Verdacht auf Hepatitis C besteht die Hauptmethode der klinischen Untersuchung in einem Ultraschall der Peritonealorgane. Der Grund ist einfach: Die Krankheit äußert sich häufig in einer visuellen Veränderung der betroffenen Leber, in Struktur und Größe. Auf diese Weise können Sie feststellen:

• die Größe der Leber, der Milz, der Bauchspeicheldrüse und der Gallenblase;
• pathologische Veränderungen in diesen Organen;
• allgemeiner Blutfluss in den Peritonealorganen;
• optimaler Bereich für eine Leberbiopsie.

Diese klinische Untersuchungsmethode bestimmt alle fokalen Pathologien eines Organs auf mikroskopischer Ebene. Wenn die Leber in einer Grauskala auf dem Bildschirm dargestellt wird, ist eine sofortige Biopsie erforderlich, da die graue Farbe das betroffene Gewebe des „menschlichen Filters“ visualisiert.

Hepatitis-Prävention

Da sich die Krankheit nicht sofort manifestiert, ist es weit von allen Krankheitsbildern entfernt, die sofort behandelt werden. Dem Patienten ist möglicherweise einfach nicht bewusst, dass es im Körper einen pathogenen Virus gibt, der sich schnell in den Blutkreislauf ausbreitet und gesunde Leberzellen infiziert.
Um ein solches tragisches Schicksal zu vermeiden, wird empfohlen, alle vorbeugenden Maßnahmen zu beachten. Eine solche Wachsamkeit verringert das Risiko für Morbidität erheblich und rettet Sie in Zukunft vor ernsthaften Gesundheitsproblemen. Die Grundregeln der Prävention werden im Folgenden dargestellt:

• Wasche deine Hände nach der Straße;
• qualitativ hochwertiger Verarbeitung von frischem Gemüse und Obst unterliegen;
• alle im jährlichen Kalenderplan angegebenen vorbeugenden Impfungen durchzuführen;
• selektive Einstellung zu Sexualpartnern;
• Kontakt mit kranken Menschen vermeiden;
• Verwenden Sie nur Einwegspritzen, und achten Sie besonders auf Bluttransfusionsstationen.

Es wird auch empfohlen, regelmäßig (alle sechs Monate) Blut für Hepatitis zu spenden, um sicherzustellen, dass das Virus nicht in den Körper eindringt und die einst gesunden Leberzellen nicht infiziert. Wenn die Diagnose festgestellt wird, ist es erforderlich, sofort ein Apothekenkonto zu erstellen und alle Empfehlungen eines Spezialisten zu befolgen.

Publikationsautor:
Syropyatov Sergey Nikolaevich
Ausbildung: Staatliche Medizinische Universität Rostow (Universität Rostow), Abteilung für Gastroenterologie und Endoskopie.
Gastroenterologe
Doktor der medizinischen Wissenschaften