Hepatitis B-PCR

Die Verfügbarkeit moderner Medikamente gegen Hepatitis B (HBV) mit eindeutigen Indikatoren für ihre Verabreichung erfordert eine genaue und schnelle Überprüfung der Diagnose. Aufgrund der knappen klinischen Daten in den ersten Wochen der Erkrankung und der eingeschränkten Immunoassay-Analysemethoden nimmt die Diagnosegeschwindigkeit jedoch ab.

Die Anwesenheit von Markern gegen Anti-HBc-IgM, HBsAg, Anti-HBc, HBeAg und Anti-HBe ermöglicht es Ihnen, HBV zu bestätigen oder die Tatsache einer früheren Krankheit festzustellen. Es ist jedoch möglich, das Vorhandensein aktiver Viruspartikel im Blut zu bestimmen und deren Anzahl zum Zeitpunkt der Studie durch PCR zu bestimmen - ein quantitativer Echtzeittest zum Nachweis von Hepatitis B. Die Methode löst im Vergleich zu den ELISA-Diagnoseverfahren diagnostische Probleme und ermöglicht die Vorhersage des Krankheitsverlaufs während des Erhalts antivirale Medikamente.

Grundlagen der Krankheitsdiagnose

Die Diagnose von Hepatitis B basiert auf der Beurteilung der klinischen Manifestationen, des Enzymimmunoassays und der instrumentellen Forschungsmethoden. Die Erkrankung verläuft in der Akutphase nach der Inkubationszeit und tritt je nach Infektionsdosis und Wirksamkeit der Behandlung in ein chronisches Stadium ein. Das Hauptziel der Behandlung ist die Verhinderung der Chronisierung, dh der Entfernung aller Viruspartikel aus dem Blut. Der klinische Verlauf der Krankheit ist eine Heilung ohne nachfolgende Virämie.

Die Beseitigung der Infektion muss durch eine quantitative Forschungsmethode nachgewiesen werden.

Da jeder qualitative Enzym-Immunoassay die indirekte Diagnose von HBV ermöglicht, das heißt, er zeigt nicht das Vorhandensein des Erregers in der inneren Umgebung des Körpers, sondern charakterisiert die Immunantwort auf die Infektion. Daher ist es schwierig, die Wirksamkeit der Therapie und die Heilung zu überprüfen. Daher sollte der Patient mit Hepatitis B oder mit diagnostischen Kriterien zu seinen Gunsten eine Polymerase-Kettenreaktion durchführen, um die Anzahl der Viruspartikel im Blut zu quantifizieren. Die diagnostische Rate ist das Fehlen von Kopien der DNA der Infektion.

Beschreibung der Diagnosemethode

Die hochempfindliche Methode der PCR-Diagnose von Hepatitis B gehört zur Kategorie gentechnisch hergestellter molekularbiologischer Studien. Durch wird bestimmt durch die Menge an viraler DNA im biologischen Material des Patienten und die zulässige Rate. Entsprechend den erhaltenen Ergebnissen wird die Anzahl der Viruspartikel pro Volumeneinheit festgelegt. Das Material für den diagnostischen Test ist das venöse Blut des Patienten. Bei leerem Magen ist eine Einnahme wünschenswert, da sich das Chyle-Serum möglicherweise auf das Ergebnis der Studie auswirkt.

Die erzielten Ergebnisse müssen dem Arzt zur Interpretation und Festlegung weiterer Taktiken zur Verfügung gestellt werden. Die unabhängige Dekodierung repräsentiert keinen Diagnosewert.

Die Signifikanz des Ergebnisses der Anzahl der durch das PCR-Verfahren erhaltenen Viruspartikel übertrifft den Wert von Enzymimmunoassays. Da die Analyse im Echtzeitmodus das Vorhandensein des Erregers der Krankheit im Blut zeigt, ist sein Informationsgehalt höher als bei anderen. Wenn der ELISA nur die Anwesenheit von Antikörpern anzeigt, die ab 4 Wochen der Inkubationszeit beobachtet wird und mehr als 8 Wochen nach der Viruseliminierung aus dem Blut dauert, dann bestätigt die Polymerase-Kettenreaktion eindeutig den aktiven Verlauf der Erkrankung oder ihre Heilung. Sie charakterisiert die Dynamik der verschriebenen Therapie.

Die Polymerase-Kettenreaktion mit quantitativer Bestimmung der Erregerpartikel löst diagnostische Fragen zu Gunsten einer Unterbrechung der Behandlung aufgrund einer Erholung oder einer fortgesetzten Therapie wegen mangelnder Wirksamkeit. Die Methode ist für das HBV-Virus so spezifisch wie möglich und zeichnet sich durch einen akzeptablen Fehler aus.

Indikationen und Leistungsziele

Die quantitative Analyse von Hepatitis B ist die zuverlässigste und ermöglicht es Ihnen, die durch ELISA-Methoden erhaltenen Daten zu bestätigen. Er wird ernannt, wenn:

1. Erhalten eines positiven diagnostischen Ergebnisses von ELISA;
2. Behandeln eines Patienten mit einer festgestellten Diagnose eines viralen Leberschadens;
3. in der Diagnose der Hepatitis gemischten Ätiologie;
4. Bestimmen Sie gegebenenfalls die Viruslast in einem Patienten.

Da das Enzym-Immunoassay-Verfahren in der Praxis eines Infektionskrankheitsspezialisten umfangreicher eingesetzt wird, können einige Patienten mit leichter Erkrankung behandelt werden, ohne die Viruslast zählen zu müssen. In der Hepatologie wird PCR jedoch allgemein als „Goldstandard“ der Diagnostik betrachtet, da aufgrund der Einzigartigkeit des Ergebnisses eine Reihe organisatorischer Probleme beseitigt wird. Daher hat die Richtung des Patienten für die quantitative Analyse die folgenden Ziele:

• Erhebung von Daten über die Anzahl der Viruspartikel im Blut des Patienten;
• Bestätigung des akuten Verlaufs der Hepatitis und rechtzeitige Überprüfung chronischer Erkrankungen;
• ständiger Nachweis latenter Virusträger mit positiven ELISA-Tests, Überwachung ihrer Virämie;
• Entscheidung über die Ernennung einer antiviralen Behandlung, deren Kombination und Beendigung.

Das wichtigste Ziel der Anwendung eines quantitativen PCR-Tests zum Nachweis von HBV ist die Identifizierung möglicher Behandlungskombinationen. Bei einer hohen Viruslast gibt das Ergebnis der Analyse dem Spezialisten die Möglichkeit, mit der Kombination von Arzneimitteln fortzufahren. Während der Therapie ist es einfach, die Wirksamkeit der verschriebenen pharmakologischen Behandlung anhand des Ergebnisses der PCR zu bestimmen. Nur durch die Daten der Immunoassay-Methoden geleitet, ist es unmöglich, die tatsächliche Behandlung und ihre derzeitige Wirksamkeit zeitnah zu bestimmen. Daher ist ein quantitativer Echtzeittest eine notwendige Analyse vor Beginn der Behandlung bei akuter Hepatitis, latenter Virusinfektion mit hoher Virämie und chronischem HBV.

Interpretation quantitativer PCR-Testergebnisse

Die Interpretation der Ergebnisse des quantitativen PCR-Tests sollte vom behandelnden Arzt des Patienten vorgenommen werden. Es ist notwendig, den diagnostischen Indikator auszuwerten und die therapeutischen Taktiken festzulegen.

Ein Standardanalysator ist in der Lage, einen quantitativen Indikator zu erzeugen, der die Anzahl der im untersuchten venösen Blut vorhandenen Kopien von viraler DNA widerspiegelt. Maßeinheiten - Kopien / ml, IE / ml (Kopien pro Milliliter, internationale Einheiten pro Milliliter). Die Interpretation der Ergebnisse ist in der Tabelle mit Angabe verschiedener Maßeinheiten angegeben.

PCR-Typen für Hepatitis B und Interpretation der Ergebnisse

Die Polymerase-Kettenreaktion stellt eine Art Bluttest dar, mit dem das Hepatitis-B-Virus genau erkannt werden kann. Ein Merkmal der Methode ist, dass HBV in einem frühen Stadium gezeigt werden kann - einen Monat nach der Infektion, während bei einem Patienten ein spezifisches Antigen erst nach 2 Monaten nachgewiesen wird. Die PCR kann nicht nur ein normales DNA-Virus nachweisen, sondern auch Mutantenstämme, die keine andere Analyse erkennen kann.

Bei der Dekodierung der PCR für Hepatitis B werden die Ergebnisse mit Standardwerten verglichen. Darauf aufbauend werden Rückschlüsse auf das Vorliegen der Krankheit (positives Ergebnis), die Viruskonzentration (Aktivität) oder das Fehlen der Krankheit (negatives Ergebnis) gezogen. Die Datenverarbeitung dauert 2 Wochen.

PCR-Typen für virale Hepatitis B

Es gibt zwei Arten von Diagnosen, die bei Hepatitis B vorgeschrieben sind. Dank hochwertiger PCR kann mit einer Genauigkeit von 100% festgestellt werden, ob HBV im Blut ist oder nicht. Quantitative PCR zeigt die Aktivität des Virus, dh wie viel HBV-DNA in 1 ml Blut enthalten ist.

Hochwertige PCR und deren Interpretation

Eine Blutuntersuchung auf Hepatitis B mittels PCR kann nur das Vorhandensein von DNA-Fragmenten feststellen. Bestimmt für den Fall, dass der Patient eine HBV-Infektion (HBV) vermutet oder wenn andere Diagnosemethoden, z. B. serologische Tests, keine eindeutige Antwort geben. Das Dekodieren der Ergebnisse bei einer qualitativen Analyse ist sehr einfach:

• negatives Ergebnis - kein Virus;
• positives Ergebnis - Virus entdeckt

Der Zweck einer qualitativ hochwertigen PCR besteht darin, das Vorhandensein des Hepatitis-B-Virus zu bestätigen oder zu verweigern sowie eine frühzeitige Diagnose durchzuführen. Wenn HBV innerhalb von 1-2 Wochen nach der Infektion festgestellt wird, ist die Behandlung so effektiv wie möglich. Mit der aktiven Entwicklung von HBV über 2 Monate hinweg wird die Krankheit chronisch und kann nicht vollständig geheilt werden.

Wenn eine hochqualitative PCR für Hepatitis durch das Vorhandensein eines Virus angezeigt wird, ist der nächste Schritt die Durchführung einer quantitativen Diagnose.

Quantitative PCR

Für eine effektive Behandlung oder Bewertung der Therapieergebnisse reicht es nicht aus, einfach zu wissen, dass der Patient HBV hat. Es ist notwendig, den Wert der DNA des Hepatitis-B-Virus in 1 ml Blut, dh die Viruslast im Körper, zu quantifizieren. Diese Art von PCR für Hepatitis B wird in den folgenden Fällen durchgeführt:

1. Vor der Verschreibung der Behandlung.
2. Um die Wirksamkeit der Therapie zu beurteilen.
3. Um die Entwicklung der Virusresistenz gegenüber den eingenommenen Medikamenten zu bestimmen.
4. Um das Stadium zu bestimmen, in dem sich die Krankheit befindet.

Die Maßeinheit für ein Virus sind internationale Einheiten (IE / ml) oder die Anzahl der DNA-Kopien / ml, d. H. Die Anzahl der DNA-Fragmente pro 1 ml Blut. Das Verhältnis zwischen den beiden Einheiten hängt vom ausgewählten Testsystem ab und liegt zwischen 2 und 7 Kopien / ml in 1 IE / ml. Wenn das System unbekannt ist, wird der gemittelte Wert zur Konvertierung verwendet:

1 IE / ml = 5 Kopien / ml

Bei sofortiger quantitativer Analyse beträgt die Grenzrate für die Diagnose der Krankheit 75 IE / ml. Wenn das Ergebnis über diesem Indikator liegt, wird die Diagnose HBV gestellt, und unter - HBV wird nicht erkannt.

Behandlung der quantitativen PCR

Bei Hepatitis B sind die folgenden Werte für die Viruslast (Virämie), Kopien / ml, die PCR-Standards:

• 10 5 Kopien / ml. Wenn bei einer hohen viralen Aktivität der ALT-Spiegel häufiger zweimal innerhalb von sechs Monaten zunimmt, wird sofort eine antivirale Therapie verschrieben.

Um herauszufinden, wie sich DNA-Hepatitis im Hinblick auf die Chronizität verhält, dh den Übergang von Akut zur chronischen Form, werden auch die Ergebnisse der PCR-Diagnostik verwendet:

• HBV-DNA von 2 x 10 ^ 6 Kopien / ml bedeutet, dass der Erwerb der chronischen Form der Krankheit unvermeidlich ist.

Vorbereitung auf die Umfrage

Um die Anwesenheit von HBV durch PCR zu bestimmen, wird Blut aus einer Vene entnommen. Das Verfahren wird immer strikt auf nüchternen Magen durchgeführt und es ist am besten, morgens ins Labor zu gehen, wenn die natürliche Ruhezeit aus der Nahrung 8 Stunden beträgt. Damit die Ergebnisse der Untersuchung korrekt sind, müssen Sie im Voraus wissen, wie Sie sich auf den korrekten Besuch der Klinik vorbereiten können. Zusätzliche Schritte sind wie folgt:

1. 12 Stunden vor dem Eingriff Weigerung von fetthaltigen Lebensmitteln, Rauchen, Alkohol und Sport.
2. Unmittelbar vor der Blutspende 20 Minuten ruhen lassen.
3. Vor Beginn des Verfahrens sollte die Krankenschwester vor den eingenommenen Medikamenten gewarnt werden.

Achtung! Wenn die Diagnose an ein Kind unter 5 Jahren gestellt wird, sollte eine halbe Stunde vor dem Eingriff alle 10 Minuten ein Glas gekochtes Wasser getrunken werden.

Zusammenfassend

Bis heute ist die PCR-Diagnostik zum Nachweis von Hepatitis B die genaueste Methode. Mit dieser Methode können Sie die verborgenen und mutierten Formen der Krankheit erkennen, die Krankheit in den ersten Wochen nach der Infektion erkennen und entsprechend eine wirksame Behandlung durchführen. Je nach Situation wird eine qualitative oder quantitative PCR durchgeführt, die darauf abzielt, HBV nachzuweisen und seine Aktivität festzustellen. Um getestet zu werden, müssen Sie sich an einen Virologen, einen Spezialisten für Infektionskrankheiten oder einen Hepatologen wenden.

Hepatitis B-DNA und PCR

DNA-Tests und PCR des Hepatitis-B-Virus sind die empfindlichsten Assays, die molekulare DNA-Spuren in der Leber nachweisen, die das Vorhandensein eines Virus identifizieren. Die Essenz der Methode besteht im mehrfachen Kopieren eines DNA-Fragments, das zum Erreger der Krankheit gehört.

Die Hepatitis-B-Typ-PCR ist eine Polymerase-Kettenreaktion eines externen chemischen Reagens mit dem untersuchten biologischen Material, das darauf abzielt, virale DNA-Moleküle im Blut und ihre quantitativen Indikatoren pro Volumeneinheit zu identifizieren. Die Analyse wird in folgenden Fällen zugeordnet:

• wenn bei einem Patienten Anzeichen einer Hepatitis B auftreten;
• während diagnostischer Aktivitäten bei gemischter Hepatitis;
• um die Wirksamkeit der Therapie zu klären.

Für die PCR-Analyse wird venöses Blut gesammelt. Vor dem Studium sollten Sie etwa 8 Stunden nicht essen.

Ein normales Ergebnis beim Nachweis von DNA in einem Virus wird als "nicht erkannt" betrachtet. Dies bedeutet, dass das Virus nicht im Blut vorhanden ist oder sein Inhalt unbedeutend ist. Die endgültige Diagnose kann nur durch einen Spezialisten auf der Grundlage einer umfassenden biochemischen und immunologischen Analyse von Blutplasma auf Hepatitis Typ B gestellt werden. Der Arzt verschreibt einen Therapieverlauf. Selbstmedikation birgt ein zu hohes Risiko.

Die venöse Blutentnahme erfolgt für die PCR-Analyse.

Die PCR-Methode ermöglicht den Nachweis der DNA des Erregers auch bei minimaler Anwesenheit in der ausgewählten Blutprobe. Darüber hinaus ermöglicht die Analyse den Nachweis von Antigenen, die bereits für das Virus entwickelt wurden. Jedes der Antigene weist auf ein bestimmtes Stadium der Erkrankung hin:

• HBsAg - das Virus ist im Moment vorhanden.
• Anti-HBcor-Erreger ist derzeit nicht vorhanden, aber in der Vergangenheit.
• Anti-HBs - Im Blut befinden sich Antikörper gegen Hepatitis B (optional - Herpes, HIV, Chlamydien, Mykoplasmose, Candidiasis, Tuberkulose, durch Zecken übertragene Enzephalitis und viele andere Krankheiten).

Pathologie und ihre Zeichen

Hepatitis B oder HBV ist eine Virusinfektion, die Leberzellen befällt. Es ist nicht nur gefährlich, wenn es direkt auf das Parenchym des Organs wirkt, was die Barrierefunktion und die allgemeine Immunität schwächt. Ernsthafte Konsequenzen sind möglich, wie Leberzirrhose und das Auftreten von malignen Tumoren.

HBV wird durch das Blut einer Person übertragen, die mit Hepatitis infiziert ist, deren Exkremente, durch Kontakt mit den Schleimhäuten, insbesondere während des Geschlechtsverkehrs, Hautläsionen, durch nicht sterile Spritzen während einer Bluttransfusion oder bei Operationen am Bauch. Ein Neugeborenes kann von seiner kranken Mutter angesteckt werden, wenn es die Risse in den Brustwarzen berührt.

Die folgenden Symptome sind für Hepatitis B charakteristisch:

Ungewöhnliche Müdigkeit

• zunehmende Ermüdung bei geringen Belastungen;
• ungewöhnliche Müdigkeit;
• Schwere im rechten Hypochondrium;
• verminderter Appetit, Übelkeit;
• Gelbfärbung der Haut, Sklera der Augen;
• helle Fäkalien;
• dunkler Urin;
• Schmerzen in den Gelenken.

Die Inkubationszeit, nach der diese Symptome auftreten, beträgt ein bis sechs Monate. Dies ist die Periode der Akkumulation von Viruszellen im hepatischen Blutkreislauf. Wenn ihre Konzentration eine kritische Masse erreicht, durchbricht das Virus die Membranen der Hepatozyten und vermehrt sich innerhalb der Zellen weiter. In der Folge sterben Leberzellen ab, es entsteht eine Zirrhose, die ohne geeignete therapeutische Maßnahmen zum Tod des Patienten führt. Ein rechtzeitiger Bluttest auf PCR- und Hepatitis-B-DNA hilft, negative zu vermeiden.

Indikationen für die PCR sind:

• positiver DNA-Test zur Bestätigung der Diagnose von Hepatitis B;
• akute und chronische Hepatitis;
• gemischte Hepatitis;
• quantitative Bestimmung des Virus im Blutserum;
• Entwicklung von Taktiken für eine wirksame Therapie.

Vorbereitung für die Analyse

Die Vorbereitung der Diagnose mittels PCR hängt von der Art des Biomaterials ab. So spenden Blut und Urin nur morgens auf nüchternen Magen. Auch Abstriche und Kratzer aus dem Urogenitalbereich. Die einzige Einschränkung für Frauen ist die Menstruation. Sex ist für beide Geschlechter am Vorabend der Forschung begrenzt.

Die Ergebnisse der PCR können nur dann als zuverlässig angesehen werden, wenn der Patient für die Prozedur richtig vorbereitet ist. Diese Studie beinhaltet die folgenden Bedingungen:

• voller geistiger tröstung, ohne aufregung. Damit diese Analyse auch zu Hause bestanden werden kann. Es ist nur erforderlich, einen Arzt mit der entsprechenden Ausrüstung anzurufen.
• Verzicht auf Nahrung, Alkohol, Rauchen, körperliche Aktivität mindestens 8-12 Stunden vor der Analyse, sonst werden die Forschungsdaten verzerrt;
• 15-20 Minuten völlige Entspannung vor der Blutentnahme;
• Absetzen von Medikamenten (wenn dies nicht möglich ist, sollte das Labor gewarnt werden);
• Kinder unter fünf Jahren sollten eine halbe Stunde vor der Analyse gekochtes Wasser in kleinen Portionen trinken.

Wie ist die Studie?

Die PCR-Analyse basiert auf den Prinzipien der Molekularbiologie. Sie bestehen in der Verwendung spezieller Enzyme, die DNA- und RNA-Teile des im Blut befindlichen Infektionserregers spalten und replizieren. Nach diesem Vorgang werden die erhaltenen Proben anhand der im Labor verfügbaren Datenbank identifiziert. Gleichzeitig werden die Art der Infektion und die Konzentration des Erregers im Blut nachgewiesen.

Für die Studie wird ein Verstärker verwendet - ein Thermostat, der Röhren mit Biomaterial heizen und kühlen kann. Dies ist für die Aktivierung von Replikationsprozessen erforderlich. Die Genauigkeit der Analyse hängt von der Genauigkeit der Temperaturparameter ab.

Ergebnisse entschlüsseln

Ein positives Ergebnis für den Patienten ist der Laborabschluss „nicht erkannt“. Es bedeutet das Fehlen von Hepatitis-B-DNA im Blut, in Zahlen ausgedrückt etwa 120 IE / ml oder 200 Kopien pro Blutvolumeneinheit. Dieser Wert ist die Norm. Die Voraussetzung für biologisches Material ist, dass es nicht kontaminiert werden darf.

Durch das Dekodieren anderer Analyseergebnisse können folgende Diagnosen gestellt werden:

• Die Hepatitis-B-DNA-Konzentration im Blut beträgt mehr als 200 Kopien, liegt jedoch unter dem kritischen Wert. Schwere Pathologie fehlt.
• Virämie in milder Form, bis zu 500 Kopien pro ml. Die Wahl der Behandlung hängt von den Indikatoren der Leberbiopsie und dem Verschlechterungsgrad ihrer Funktionen ab.
• Erhöhte Viruskonzentration (mehr als 500 Kopien / ml). Der Entzündungsprozess in der aktiven Phase erfordert eine intensive antivirale Therapie.
• Maximale Viruslast (über 800 Kopien pro ml). Therapeutische Maßnahmen werden auf der Grundlage des Zustands des Patienten entwickelt und zielen ausschließlich auf die größtmögliche Verbesserung ab.

Für den Patienten ist der Schluss "nicht erkannt" ein gutes Ergebnis.

Die Bestimmung der quantitativen Indikatoren für den DNA-Gehalt von Hepatitis B während der PCR ist die Grundlage für die Wahl des therapeutischen Verlaufs. Nach drei oder sechs Monaten werden erneut Tests durchgeführt, um die Wirksamkeit der antiviralen Therapie zu testen.

Polymerase-Kettenreaktionsmerkmal

In der PCR-Methode werden zwei Ansätze zur Bestimmung der zum Virus gehörenden DNA verwendet: qualitative und quantitative.

Ein qualitativer Ansatz bestätigt oder bestreitet das Vorliegen einer Hepatitis B. Die PCR wird auf Antrag eines Patienten mit Verdacht auf eine HBV-Infektion oder in Fällen, in denen eine frühzeitige Diagnose auf keine andere Weise eindeutige Ergebnisse liefert, vorgeschrieben.

Wenn das Hepatitis-B-Virus spätestens zwei Wochen nach Eintritt in den Körper nachgewiesen werden kann, ist eine positive Prognose für die Behandlung am wahrscheinlichsten. In Zukunft wird die Krankheit fortschreiten. Nach etwa zwei Monaten tritt sie in eine chronische Phase ein. Eine vollständige Heilung wird in diesem Fall unmöglich.

Ein quantitativer Ansatz für die PCR wird nur verwendet, wenn ein Virus entdeckt wird. Er bewertet:

• spezifische Viruslast in der Leber;
• die Intensität des Fortschreitens der Krankheit;
• Resistenz gegen antivirale Medikamente;
• Wirksamkeit der Behandlung.

Diese Indikatoren sind von direkter praktischer Bedeutung. Besonders quantitativer Indikator für DNA. Die Prognose in der akuten Phase der Hepatitis B hängt von der Konzentration des Virus im Blutkreislauf der Leber ab, so dass eine niedrige Konzentration an Viruszellen den Übergang von akuter zu chronischer Hepatitis fast vollständig ausschließt. Solche Patienten stellen keine Gefahr für andere dar. Eine hohe Viruslast trägt zur Chronisierung des pathologischen Prozesses und der Möglichkeit einer Hepatitis-Infektion bei Personen bei, die mit dem Patienten in Kontakt stehen.

Es besteht auch ein Zusammenhang zwischen der Konzentration der Virusgene im Blut und der zirrhotischen Degeneration der Leber und dem Auftreten von Parenchymkrebs.

PCR-Tests helfen dem Arzt, Virusträger zu erkennen.

Die Wirksamkeit der antiviralen Therapie wird durch den Grad der Abnahme der Konzentration der Hepatitis B-DNA im Leberkreislauf bestimmt. Ein ausreichendes Ergebnis ist die 1-2-fache Verringerung der Viruslast bei intensiver Behandlung von drei bis sechs Monaten. Niedrigere Raten erfordern eine Änderung der Behandlung.

Die Prognose der Entwicklung der Pathologie und die Bestimmung einer geeigneten Therapie stammen von:

• quantitatives Volumen an Lebervirus-DNA im Blutserum;
• verwandte biochemische Parameter (z. B. Leukozytengehalt im Blut und dortiger Bilirubingehalt);
• virale Infektionsmarker;
• Ergebnisse der Leberbiopsie.

Allzweck-PCR

Analysen mit Hilfe der Polymerase-Kettenreaktion helfen dem Arzt:

• Träger des Virus erkennen;
• die Entwicklung von Hepatitis Typ B vorhersagen;
• sicherstellen, dass die Krankheit chronisch wird;
• die Aktivität des Virus in allen Entwicklungsphasen überwachen;
• mutierte und versteckte Hepatitis-B-Stämme identifizieren;
• Bewerten Sie die Wirksamkeit der Behandlung des Virus bei der Wahl einer bestimmten Taktik und ändern Sie diese bei ungenügendem Erfolg.

Vorteile der Methode

Im Gegensatz zu anderen Tests, die zur Diagnose von Hepatitis B verwendet werden, hat die PCR:

Die PCR-Analyse ist äußerst empfindlich.

1. Außergewöhnliche Empfindlichkeit. Die Technik ermöglicht es dem Forscher, den Erreger der Krankheit zu erkennen, selbst wenn die Konzentration seiner DNA-Moleküle im Blut minimal ist. Auf diese Weise können Sie in einem frühen Stadium der Krankheit vorbeugende und kurative Maßnahmen ergreifen, wenn es anscheinend noch nicht durch Symptome ausgedrückt wird.
2. Breite Abdeckung von Möglichkeiten. Die PCR kann nicht nur den Erreger der Virushepatitis B, sondern auch eine Reihe anderer Pathologien nachweisen.
3. Universalität der Ansätze. Das Biomaterial für die Forschung kann Blut, Speichel, Schleimzellen und Haut sein.
4. Effizienz Die Schlussfolgerung liegt genau einen Tag nach der Blutentnahme vor (das Ergebnis der Analyse selbst wird nicht später als 7 Stunden erhalten).
5. Glaubwürdigkeit Unter allen Bedingungen der PCR-Methode werden niemals falsche Daten angezeigt.
6. Preis-Zugänglichkeitsstudie. Bei den Kosten ist die PCR nur geringfügig höher als bei den üblichen Tests, bei denen Blut als Biomaterial verwendet wird.

Die einzigen Forschungskosten sind die technologische Komplexität. Für eine qualitativ hochwertige Implementierung von PCR sind ein extrem sauberes Biomaterial, moderne Geräte und gut ausgebildetes Personal erforderlich. Es ist vorzuziehen, die Diagnose mit dieser Methode bei spezialisierten Laboratorien zu beantragen.

Virale Hepatitis B bezieht sich auf Erkrankungen, deren vollständige Heilung nur in den frühesten Entwicklungsstadien möglich ist. Das Erkennen der Krankheit in dieser Phase hilft bei der hypersensiblen Diagnose durch PCR. Die ersten Symptome, die den Verdacht auf Leberschäden durch ein Virus verursachen, sollten ein Grund sein, einen Spezialisten zu konsultieren. Wenn die Diagnose bestätigt ist, sollte die Behandlung sofort beginnen. Dies wird die Prognose verbessern und die Wahrscheinlichkeit erhöhen, dass die Leber über viele Jahre in einem gesunden Zustand gehalten wird.

Blutuntersuchung auf Hepatitis B entschlüsseln

Hepatitis B ist eine der gefährlichsten Krankheiten unserer Zeit.

Sie wird durch ein Virus verursacht, das in den Körper gelangt, wenn das Blut mit infiziertem biologischem Material in Kontakt kommt, einschließlich solcher, die sich auf Manikürezubehör befinden, medizinischen Instrumenten und Tätowiermaschinen, die nicht ordnungsgemäß desinfiziert wurden. Das Virus kann auch durch sexuellen Kontakt übertragen werden.

Hepatitis B wird analysiert, um die Krankheit durch Blutentnahme des Patienten zu diagnostizieren.

Die Infektion erfolgt durch sexuelle und häusliche Wege, die Art der Ausbreitung ist hämatogen (durch Blut). Bei der Infektion dringt das Virus in die Hepatozyten (Leberzellen) ein, die in der Zukunft produziert werden. Durch den Blutstrom breitet sich die Krankheit schnell im ganzen Körper aus. Das Virus B (HBV) zeichnet sich durch eine hohe Widerstandsfähigkeit gegen Temperatur und Säure aus und kann seine schädigenden Eigenschaften für sechs Monate aufrechterhalten.

Welche Blutuntersuchungen haben Sie bei Hepatitis B?

Wenn die Hepatitis B die ersten Symptome zeigte, müssen die Tests vor Beginn der Therapie und Behandlung bestanden werden. Eine Blutuntersuchung ist eine zuverlässige Methode zur Installation einer Hepatitis-Infektion. Im Labor durchgeführt. Hepatitis-B-Testmaterial wird auf leeren Magen verabreicht: Nach der letzten Mahlzeit sollten mindestens 8 Stunden vergangen sein.

Um das Hepatitis-B-Virus im Blut zu erkennen, werden drei Arten von Tests verwendet, die das Vorhandensein des Virus im Blut charakterisieren:

• Analyse auf das Vorhandensein von HBV-DNA in dem Material durch Untersuchen der Polymerasekettenreaktion;
• qualitative Studie über das Vorhandensein des Anti-HBc-IgG-Proteins und des HBsAg-Antigens (bei gesunden, infizierten und kranken Personen);

• Analyse zum Nachweis der Proteine ​​HBeAg und Anti-HBc IgM (kennzeichnen die Verschlechterung der Krankheit).

Der Vollständigkeit halber wird empfohlen, gleichzeitig mehrere Marker zu untersuchen.

Immunologische Tests auf Hepatitis B

Die häufigsten Tests für Hepatitis B sind immunologisch. Ihre Essenz ist der Nachweis von Antikörpern im Blut des Körpers oder der Leber. Proben sind qualitativ und quantitativ. Hepatitis-B-Tests und -Transkripte enthalten normalerweise Informationen zu mehreren charakteristischen Proteinen. Während des Tests werden folgende Antikörper getestet:

Es tritt in den frühen Stadien der Infektion vor dem Einsetzen der klinischen Anzeichen auf.

Ein positiver Marker zeigt das Vorhandensein eines Virus an, ist aber auch bei völlig gesunden Menschen zu finden. Wenn im Blut weniger als 0,05 IE / ml vorhanden sind, wird das Ergebnis als negativ betrachtet. Wenn die Konzentration des Antikörpers höher ist, wird die Analyse als positiv betrachtet.

Es ist in praktisch jedem infizierten Patienten zu finden. Wenn die Indikatoren auf einem hohen Niveau gehalten werden, kann dies auf einen Übergang der Krankheit in eine chronische Form des Verlaufs hindeuten. Ein positiver Marker zeigt das Vorhandensein der Krankheit in der Zeit der Exazerbation und die Erholung an. HBeAg ist ein extrem schlechtes Zeichen. Der Patient ist sehr ansteckend. Normalerweise wird kein Protein im Blut nachgewiesen.

Es gibt zwei Arten von Anti-HBc-Antikörpern: IgG und IgM. Das Vorhandensein von IgM im Blut ist ein Zeichen für den Verlauf der akuten Form, die hohe Infektiosität des Patienten und die Möglichkeit der Erkrankung Pererohoda in der chronischen Form. Normalerweise ist die Anwesenheit von IgM nicht erlaubt. IgG ist ein günstiger Indikator. Der Marker zeigt die körperimmunisierte Immunität gegen Hepatitis B

Wird ein Marker im Blut nachgewiesen, kann auf den günstigen Verlauf der Erkrankung und die Bildung einer schützenden Immunität beim Patienten geschlossen werden.

• Anti-HBs.

Der Marker signalisiert die Erholung und die Bildung von Immunität.

HBV-DNA-Nachweis mittels PCR

Für die Laboruntersuchung und den Nachweis einer Hepatitis-B-Diagnose im Blut wird die PCR-Methode verwendet. Die Art und Weise, in der die Polymerasekettenreaktion betrachtet wird, ist die aktuellste auf dem Gebiet der Erkennung von Krankheiten.

Die endgültige Entschlüsselung zeigt, ob in den Leberzellen Spuren des Gens des Erregers vorhanden sind.

Wenn während der Forschung alle Prinzipien befolgt werden, ist das Ergebnis absolut genau. Die Methode wird zur Diagnose in der Behandlung und in der antiviralen Therapie eingesetzt.

1. Eine qualitativ hochwertige PCR in der Summe hat nur zwei Bedeutungen: "erkannt" und "nicht erkannt". Das Verfahren wird für jeden Patienten mit Verdacht auf Hepatitis durchgeführt. Bei einer durchschnittlichen Sensitivität des PCR-Tests im Bereich von 10 bis 500 IE / ml und bei geringen Virus-DNA-Konzentrationen im Blut wird kein Genmaterial nachgewiesen.
2. Quantitative PCR. Im Gegensatz zum qualitativen Wert gibt es nicht nur Hepatitis B an. Die quantitative Analyse zeigt, wie weit die Norm eines gesunden Menschen numerisch von den Indikatoren des Patienten entfernt ist. Die Methode erlaubt es, das Stadium der Erkrankung zu beurteilen und die Behandlung zu verschreiben. Die Sensitivität des PCR-Tests in quantitativer Folge ist höher als in der qualitativen Methode. Basis ist die Anzahl der nachgewiesenen DNA, die in Kopien pro Milliliter oder IE / ml ausgedrückt wird.

Darüber hinaus bietet die quantitative PCR einen Einblick in die Auswirkungen der Behandlung und die Richtigkeit der gewählten Therapie. Abhängig von der Menge des viralen Genmaterials kann entschieden werden, die Behandlungsdauer zu verkürzen oder umgekehrt zu verlängern und zu verstärken.

Biochemischer Bluttest auf Hepatitis B

Die Methode der biochemischen Analyse ist erforderlich, um ein vollständiges klinisches Bild des Krankheitsverlaufs zu erhalten. Diese Diagnosemethode vermittelt ein Verständnis für die Arbeit der inneren Organe (Leber, Niere, Gallenblase, Schilddrüse und andere). Die Dekodierung vermittelt ein Verständnis der Stoffwechselrate im Körper und der möglichen Stoffwechselerkrankungen. Detaillierte Indikatoren weisen auf einen Mangel an Vitaminen, Makronährstoffen und Mineralien hin, die für die menschliche Gesundheit und das Leben notwendig sind.

Sie können einen Hepatitis-Test in jedem anderen diagnostischen Zentrum (Invitro, Gemotest usw.) durchführen. Der biochemische Bluttest zum Nachweis von Hepatitis B umfasst die folgenden Komponenten.

Quantitative Analyse des Enzyms ALT (AlAt)

Dieses Enzym ist am häufigsten in erhöhten Konzentrationen bei akuter und chronischer Hepatitis zu finden. Die Substanz ist in den Leberzellen enthalten und gelangt mit Organverletzungen durch den Blutstrom in die Blutgefäße.

Die Menge und Konzentration im Blut während einer Viruserkrankung ändert sich ständig, daher wird mindestens vierteljährlich geforscht. ALT spiegelt nicht nur die Aktivität des Hepatitis-Virus wider, sondern auch den Grad der Beeinträchtigung der Leber. Der ALT-Spiegel steigt mit zunehmenden Mengen an toxischen Substanzen aus der Leber und in Gegenwart des Virus.

Quantitative Analyse des AST-Enzyms

Protein ist Bestandteil der wichtigsten menschlichen Organe: Leber, Nervengewebe, Nierengewebe, Skelett und Muskeln. Das Enzym ist am Aufbau des wichtigsten Muskels beteiligt - des Herzens. Ein hoher AST bei einem Patienten mit Hepatitis B kann eine Leberfibrose signalisieren. Eine ähnliche Situation tritt auf, wenn Alkohol, Drogen oder andere toxische Schäden an den Leberzellen auftreten.

Überhitzungsindikatoren sind ein Zeichen für einen Leberschaden auf Zellebene. Bei der Diagnosestellung ist das Verhältnis von AST und ALT (de Rytis-Koeffizient) zu berücksichtigen. Eine gleichzeitige Erhöhung der Konzentration beider Enzyme ist ein Zeichen einer Lebernekrose.

Bilirubin

Die Substanz wird in der Milz und in der Leber als Folge des Abbaus von Hämoglobin in ihren Geweben gebildet. Diese Komponente ist Teil der Galle. Es gibt zwei Proteinfraktionen: direktes Bilirubin (gebunden) und indirektes Bilirubin (frei). Bei einem Anstieg des blutgebundenen Bilirubins ist es sinnvoll, Hepatitis oder andere Leberschäden zu vermuten. Dies steht in direktem Zusammenhang mit der Zytolyse von Leberzellen.

Wenn die Menge an indirektem Bilirubin zunimmt, liegt höchstwahrscheinlich eine Läsion von Parenchymgewebe oder Gilbert-Syndrom vor. Der gemäß den Analyseergebnissen hohe Bilirubinspiegel kann auf eine Verstopfung der Gallengänge zurückzuführen sein. Wenn der Bilirubinspiegel mehr als 30 Mikromol pro Liter beträgt, zeigt der Patient einen ikonischen Farbton der Haut, der Urin wird dunkel und das Weiß der Augen ändert seine Farbe.

Albumin

Die Synthese dieses Proteins erfolgt in der Leber. Wenn seine Menge reduziert wird, deutet dies auf eine Abnahme der Synthese von Enzymen im Körper aufgrund des Auftretens schwerer Läsionen der Leberzellen hin.

Gesamtprotein

Wenn die Gesamtproteinmenge signifikant unter die akzeptierte Norm fällt, deutet dies auf eine Verlangsamung der Leberfunktion hin.

GGT (GGTP)

Ein Enzym, das beim Nachweis von obstruktiver Gelbsucht und Cholezystitis verwendet wird. Ein Anstieg des GGT-Spiegels ist ein Signal für einen toxischen Leberschaden. Kann durch chronischen Alkoholismus und unkontrollierten Drogenkonsum provoziert werden. Protein ist besonders empfindlich gegen Toxine und Alkohol, unter dessen Einfluss seine Aktivität schnell wächst. Die Aufrechterhaltung einer hohen GGT-Konzentration im Blut spricht für einen schweren Leberschaden.

Kreatinin

Es ist ein Produkt des Eiweißstoffwechsels, das in der Leber auftritt. Ein starker Pegelabfall ist ein Signal dafür, dass das Organ langsamer wird.

Proteinfraktionen

Eine Abnahme des Gehalts an Proteinfraktionen ist ein Zeichen für eine Leberpathologie.

Die Dekodierungsanalyse für Hepatitis B und deren Werte sind normal

Die Diagnose Hepatitis B ist eine kumulative Studie über Indikatoren. Nur ihre umfassende Analyse lässt Rückschlüsse auf die Infektion des Patienten zu. Betrachten Sie die Entschlüsselungsanalyse für Hepatitis B. Zum Vergleich die Rate der Substanzen im Blut.

PCR-Analyse für Hepatitis B

Das DNA-Virus der Hepadnaviridae-Familie ist der direkte Erreger von Hepatitis B. Durch die PCR-Analyse von Hepatitis B kann das Vorhandensein eines infizierten DNA-Virus im Blut eines Patienten nachgewiesen werden. Das Ergebnis eines positiven Typs der HBV-DNA zeigt das Vorhandensein einer Infektion im Blut des Patienten. Es sei darauf hingewiesen, dass die Diagnose mittels PCR-Analyse nicht nur das Vorhandensein einer Infektion, sondern auch deren quantitative Belastung und Aktivität bestimmen kann. Diese Methode ist zuverlässig, genau und reproduzierbar. Die Quantifizierung von HBV-DNA mit qPCR kann verwendet werden, um die Wirksamkeit der HBV-Therapie zu überwachen und zum Verständnis der Naturgeschichte von HBV in einem endemischen Gebiet von Nutzen zu sein.

Die Infektion mit Hepatitis B erfolgt durch häuslichen oder sexuellen Kontakt - durch direkten Kontakt mit infiziertem Blut. Nach der Infektion dringt das Virus in die Leberzellen ein und setzt seine aktive Fortpflanzung fort. Durch den Blutkreislauf breiten sich pathogene Zellen im ganzen Körper aus. Es ist erwähnenswert, dass Hepatitis-B-Zellen gegenüber Säure und hohen Temperaturen sehr resistent sind. Er kann seine schädigenden Eigenschaften sechs Monate lang aufrechterhalten.

Arten von PCR für Hepatitis B

Bis heute gibt es zwei Arten von Diagnosen, die bei Verdacht auf Hepatitis-B-Virus vorgeschrieben werden: qualitative PCR (ermöglicht die 100% ige Bestimmung des Vorhandenseins des Virus im Blut) und quantitative PCR (ermöglicht die Bestimmung des Virusaktivitätsgrades).

Eine qualitativ hochwertige PCR wird verschrieben, wenn der Verdacht auf eine HBV-Infektion besteht oder wenn andere diagnostische Methoden kein eindeutiges Ergebnis ergeben haben. Diese Art der PCR-Analyse ist äußerst leicht zu entschlüsseln: negativ (kein Virus im Blut entdeckt), positiv (im Blut nachgewiesen). Die Hauptaufgabe der qualitativen Analyse besteht darin, das Vorhandensein infizierter Zellen in den frühen Stadien der Krankheit festzustellen. Wenn das Virus zwei Wochen nach der angeblichen Infektion diagnostiziert wurde, ist die Wirksamkeit der Behandlung viel höher. Wenn das Virus im Blut etwa zwei Monate alt ist, wird die Krankheit chronisch und kann daher nicht vollständig geheilt werden.

Wenn eine qualitative Diagnose das Vorhandensein von HBV im Blut bestätigt, schreibt der Arzt eine quantitative Analyse vor.

Die quantitative Analyse ermöglicht die Bestimmung der Aktivität der Entwicklung des Virus im Körper des Patienten. Diese Art der PCR-Analyse wird zugewiesen:

• um das Stadium der Krankheit zu bestimmen;
• die Wirksamkeit der angewandten Therapie zu überwachen;
• um das Ausmaß der Resistenz des Virus gegen ein bestimmtes Medikament zu bestimmen;
• für die Auswahl von Drogen.

Quantitative Indikatoren für das Virus im Blut werden in IE pro Milliliter oder DNA pro Milliliter gemessen.

Wenn der Arzt sofort eine quantitative Diagnose ohne Qualitätskontrolle vorschreibt, beträgt die Rate 75 IE pro Milliliter. Wenn weniger internationale Einheiten nachgewiesen werden, führt dies dazu, dass HBV nicht erkannt wird, wenn die Werte über dem Normalwert liegen, und das Vorhandensein einer Virushepatitis B diagnostiziert wird.

Interpretation der quantitativen Diagnose

Die folgenden Indikatoren (in Kopien / Milliliter) gelten als die Norm von CRP bei Hepatitis B: weniger als 10 3 - inaktives Virus; von 10 4 bis 10 5 - das Virus ist normalerweise inaktiv; 10 6 - aktives Virus; 10 7 - ein Virus in einem hohen Aktivitätsstadium.

Anhand quantitativer Indikatoren kann die Form der Erkrankung (Träger, akut oder chronisch), die Reaktion des Virus auf die Behandlung und die Notwendigkeit zusätzlicher Diagnostika mit 100% iger Genauigkeit bestimmt werden.

Die chronische Form der Hepatitis B wird festgestellt, wenn die Aktivität des Virus 10 5 Kopien pro Milliliter beträgt. Ein Träger wird diagnostiziert, wenn die Werte unter 10 5 Kopien pro Milliliter liegen.

Während des Behandlungszeitraums ist es erforderlich, die quantitative Diagnostik regelmäßig (alle drei Monate) zu wiederholen, um rechtzeitig den Zeitraum zu berücksichtigen, in dem das Virus eine Immunität gegenüber den verwendeten Medikamenten entwickelt, und die Methode zu ändern. Wenn alle Studien korrekt durchgeführt wurden und eine wirksame Behandlung ausgewählt wurde, zeigt eine wiederholte Analyse (nach drei Tagen der Behandlung) eine Abnahme der Aktivität pathogener Zellen um mindestens 85%.

Eine Leberbiopsie wird nur in dem Fall durchgeführt, in dem nach sechsmonatiger Behandlung gezeigt wurde, dass die ALT-Spiegel doppelt so hoch wie normal sind und die PCR-Diagnostik niedrigere Raten als 10 5 Kopien pro Milliliter Blut aufweist.

Vorbereitung auf die Umfrage

Für die Analyse ist venöses Blut erforderlich. Um die genauesten Ergebnisse zu erhalten, ist es notwendig, sich auf das Verfahren vorzubereiten: Mindestens acht Stunden vor der Blutentnahme keine Nahrung zu sich nehmen; für zwei Tage, um die medikamentöse Behandlung abzulehnen (der Arzt muss unbedingt vor der Einnahme der Medikamente gewarnt werden); Sie müssen zwanzig Minuten im Ruhezustand verbringen, bevor Sie Blut spenden können. Zwölf Stunden vor dem Eingriff, Sportübungen, alkoholische Getränke, Rauchen und fetthaltige Speisen aufgeben.

Es ist wichtig: Wenn die Diagnose für ein Kind unter fünf Monaten erforderlich ist, muss es alle zehn Minuten ein Glas gekochtes Wasser 60 Minuten vor der Blutentnahme geben.

Zusammenfassend

Die PCR-Analyse für Hepatitis B ist heute die genaueste Methode zur Diagnose eines Virus. Die Methode erlaubt es, die mutierten und verborgenen Formen der Krankheit zu bestimmen, um die Krankheit in den ersten Tagen der Infektion zu diagnostizieren und somit die effektivste Behandlung zu wählen. Der Laborassistent vergleicht die Ergebnisse der Analyse mit der Norm und bringt sie zum Abschluss. Die Daten werden innerhalb von zwei Wochen verarbeitet. Um eine Überweisung für die PCR-Analyse zu erhalten, müssen Sie sich an einen Hepatologen, einen Spezialisten für Infektionskrankheiten oder einen Virologen wenden. Es ist wichtig zu wissen, dass je früher Sie zum Arzt kommen, desto schneller werden die Ergebnisse erzielt, desto wirksamer ist die Behandlung.

Die Essenz der Analyse der PCR auf Hepatitis B und ihre Ergebnisse

Die Virushepatitis B wird erfolgreich behandelt, wenn sie rechtzeitig erkannt und die Anzahl der Antikörper und Antigene im Blut des Patienten richtig bestimmt wird. Mit Hilfe eines Enzymimmunoassays für Hepatitis ist es möglich, Virusmarker nachzuweisen, sie können jedoch nicht das genaue Stadium des Prozesses bestimmen.

Zur quantitativen Auswertung verwendete PCR-Diagnostika. Mit Hilfe des Tests ist es möglich, die Anzahl der Marker zu zählen, den Verlauf der Erkrankung und die Heilungswahrscheinlichkeit mithilfe antiviraler Medikamente vorherzusagen.

Der Hauptvorteil der Studie ist die Fähigkeit, selbst minimale Konzentrationen des Virus zu erkennen und den Erreger im Speziesstadium zu identifizieren.

Diagnose von Hepatitis B

Das Hepatitis-B-Virus ist stark ansteckend und resistent gegen äußere Einflüsse. Es bleibt mehrere Wochen im Blut eines Patienten aktiv. Daher besteht bei jeder Person ein Infektionsrisiko, auch wenn eine Prophylaxe beobachtet wird.

Um die Krankheit zu diagnostizieren, schreiben Sie folgende Studien vor:

Die Essenz der PCR-Methode

Der amerikanische Chemiker K. Mullis erhielt den Nobelpreis und seine Diagnosemethode wird immer noch angewendet.

Vorfahr der PCR-Methode (Polymerase-Kettenreaktion) gilt als Wissenschaftler aus Norwegen H. Kleppe. Er begann zunächst mit der Amplifikation (Erholung) von DNA unter Verwendung einer kurzen DNA-Kette, dh eines synthetischen Primers (einer Art Kopie).

Der Wissenschaftler konnte seine Idee jedoch nicht realisieren. Ähnliche Studien hat der amerikanische Chemiker K. Mullis gemacht, der 1993 für seine Erfindung den Nobelpreis erhielt. Seitdem wurde die PCR zur Feststellung der Vaterschaft, zur Diagnose genetischer Erkrankungen und zum Aufspüren von Viren eingesetzt.

Die Essenz der Reaktion besteht darin, dass mit Hilfe von Enzymen ein bestimmtes Stück DNA kopiert wird. Sie können nur den Bereich kopieren, der den angegebenen Parametern entspricht und sich im dargestellten Beispiel befindet. Die folgenden Komponenten werden zum Starten der Reaktion verwendet:

1. Matrix-DNA mit einer zu kopierenden Stelle.
2. Primer ähneln in ihrer Struktur der DNA.
3. Polymerase, dh das Enzym, das die Reaktion auslöst. Es sollte thermostabil sein, das heißt, extremen Temperaturen standhalten.
4. Lösung mit bestimmten Parametern, um den Durchtritt der Reaktion sicherzustellen.

Die Reaktion wird in mehreren Stufen durchgeführt:

Zum Nachweis von Hepatitis B werden zwei Arten von Reaktionen verwendet: quantitative und qualitative.

Quantitative PCR

Die quantitative Methode bestimmt die Menge des HBV-Genoms

Bei der quantitativen PCR werden gleichzeitig Kopien von DNA-Fragmenten erstellt und die Anzahl der Moleküle bestimmt. Die Messung erfolgt nach jeder Stufe, dh in Echtzeit. Dies wird durch die Verwendung fluoreszierender Sonden erreicht, die in einer Molekülkette enthalten sind und in einem bestimmten Zeitraum der Studie leuchten.

Diese Methode wird zum Nachweis von DNA-Fragmenten verwendet, die Marker des Hepatitis-Virus sind. Mit Hilfe der quantitativen Methode kann der Virusgenotyp genau isoliert werden. Mit anderen Worten wird die Anzahl von Kopien des HBV-Genoms pro Patientenzellennummer berechnet.

Die quantitative Analyse liefert Antworten auf folgende Fragen:

1. Mit welcher Intensität schreitet die Krankheit voran?
2. Wie effektiv ist die Behandlung?
3. Hat sich Arzneimittelresistenz entwickelt?

Für die Diagnose des chronischen Infektionsstadiums ist auch eine quantitative Messung erforderlich. Wenn die DNA-Menge bei normalem Transaminaseniveau unter 100 Stck./ml liegt, ist die Person ein Träger des Virus.

In der Akutphase ist die Menge an Antikörpern viel höher: In der antiviralen Therapie deutet eine Zunahme der Anzahl der Antikörper auf die Entwicklung einer Medikamentenresistenz hin, dies ist ein Signal zur Anpassung der Behandlung.

Hochwertige PCR

Eine qualitativ hochwertige PCR liefert weniger Informationen, kann jedoch die Infektion beseitigen.

Hochwertige PCR kann nur das Vorhandensein des Erregers im Blut feststellen. Fehlen sie, ist der Patient nicht infiziert, wenn der Erreger ins Blut gelangt, ist das Ergebnis positiv.

Mit Hilfe der qualitativen Reaktion ist es jedoch unmöglich, das Genom des Virus, das Stadium der Erkrankung, zu klären. Daher wurde für die Diagnose von HBV sowohl eine quantitative als auch eine qualitative Messung durchgeführt.

Vorbereitung auf die Umfrage

Für die PCR-Analyse wird venöses Blut benötigt. Dies muss morgens auf nüchternen Magen geschehen.

Der Patient sollte sich ordnungsgemäß auf die Studie vorbereiten:

1. Für 10 Stunden, um das Essen abzulehnen, können Sie nur sauberes Wasser trinken.
2. Am Vorabend der Einnahme von Alkohol 4 Stunden lang nicht rauchen.
3. Vor der Untersuchung sollten körperliche und seelische Belastungen vermieden werden.
4. Beenden Sie die Einnahme von Medikamenten für 2 Tage. Wenn dies nicht möglich ist, müssen Sie den Labortechniker benachrichtigen. Einige Medikamente beeinflussen das Endergebnis.

Interpretation der Daten

In einer quantitativen Reaktion werden die erhaltenen Indikatoren in Abhängigkeit von der Anzahl der DNA-Kopien bewertet.

Qualitätsmessdaten lassen sich leicht interpretieren. Er gibt entweder eine positive oder eine negative Antwort.

In einer quantitativen Reaktion können die erhaltenen Indikatoren in Abhängigkeit von der Anzahl der DNA-Kopien bewertet werden. Maßeinheit ist Kopien / ml.

Die Daten werden wie folgt dekodiert:

1. Wenn die Menge an HBV-DNA weniger als 90 beträgt, fehlt die Infektion. Der Patient entwickelte eine Immunität nach der Impfung oder er wurde von der Krankheit geheilt.
2. Wenn die Anzahl der Kopien 2x100 über den Träger des Virus spricht.
3. Die Zahl 2x106 zeigt ein chronisches Stadium der Krankheit an.
4. Bei mehr als 2x109 DNA hat der Patient ein akutes Stadium der Hepatitis.

Falsche Ergebnisse

Die Vorteile des Diagnoseverfahrens unter Verwendung von Polymerasereaktionen sind wie folgt:

1. Direkter Nachweis von Krankheitserregern. Im Gegensatz dazu liefert der ELISA Informationen über das Vorhandensein von Antikörpern gegen das Virus.
2. Besonderheit Das heißt, es ist die DNA-Region, die in der Biomaterialprobe vorhanden ist, die kopiert wird.
3. Überempfindlichkeit. Das Verfahren kann sogar einzelne Zellfragmente nachweisen.
4. Diagnose von Krankheiten im akuten und latenten Stadium. Das heißt, es ist möglich, die Krankheit im Stadium der präklinischen Manifestationen zu diagnostizieren.

Die Methode hat Fehler, die zu falschen Ergebnissen führen. Der größte Nachteil ist die Wahrscheinlichkeit einer Kontamination des Materials. Die Hauptquelle der Kontamination sind schlecht verarbeitete Reagenzgläser, Laborhände und Reagenzien.

Ein Teil der DNA einer vorherigen Reaktion kann ins Blut gelangen. Daher werden an die Laboratorien erhöhte hygienische Anforderungen gestellt: separate Räume, Kunststoffröhrchen, UV-Behandlung von Laboratorien usw.

Falsch negative Ergebnisse können auf eine verminderte Reaktionsempfindlichkeit zurückzuführen sein. Dies geschieht in folgenden Situationen:

• der Patient nimmt Medikamente ein, beispielsweise Antikoagulanzien;
• die Person wurde vor der Analyse körperlich belastet (Sport treiben, harte Arbeit);
• Infektion ist vor kurzem aufgetreten.

Wenn der Patient eine hohe Infektionswahrscheinlichkeit hat und das Ergebnis der Studie negativ ist, muss er erneut untersucht werden.

Siehe auch:

Fazit

Das Polymerase-Kettenreaktionsverfahren ist das wichtigste und aussagekräftigste für die Diagnose von HBV. Es erlaubt nicht nur, den Trägerstatus der Infektion festzustellen, sondern auch das Stadium der Erkrankung zu klären, um die Behandlungsergebnisse auszuwerten.

Für eine genauere Diagnose wird eine qualitative und quantitative Messung verwendet. Die Nachteile des Verfahrens sind die Wahrscheinlichkeit einer Kontamination, eine verringerte Empfindlichkeit und ein ziemlich hoher Preis.

Damit die Ergebnisse am zuverlässigsten sind, sollte man sich auf die Studie richtig vorbereiten und sie mit der entsprechenden Lizenz und dem guten Ruf in der Klinik durchführen.

Studien zum Hepatitis-B-Virus (ELISA und PCR)

Hepatitis-B-Virus-Antigen (HBsAg)

Hepatitis-B-Oberflächenantigen im Serum ist normalerweise nicht vorhanden.
Der Nachweis von Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAg) im Serum bestätigt eine akute oder chronische Infektion mit dem Hepatitis-B-Virus.

Bei akuten Erkrankungen wird HBsAg in den letzten 1-2 Wochen der Inkubationszeit und den ersten 2-3 Wochen der klinischen Periode im Serum nachgewiesen. Die Durchblutung von HBsAg im Blut kann auf einige Tage begrenzt sein. Sie sollten sich daher um eine frühzeitige erste Untersuchung der Patienten bemühen. Die ELISA-Methode ermöglicht den Nachweis von HBsAg bei mehr als 90% der Patienten. Bei fast 5% der Patienten wird bei den empfindlichsten Forschungsmethoden kein HBsAg nachgewiesen. In solchen Fällen wird die Ätiologie der Virushepatitis B durch das Vorhandensein von Anti-HBcAg-JgM oder -PCR bestätigt.

Die HBsAg-Konzentration im Serum bei allen Hepatitis B-Schweregraden auf dem Höhepunkt der Erkrankung weist einen erheblichen Schwankungsbereich auf, jedoch gibt es ein bestimmtes Muster: In der akuten Periode besteht ein umgekehrter Zusammenhang zwischen der HBsAg-Konzentration im Serum und dem Schweregrad der Erkrankung.

Hohe Konzentrationen von HBsAg treten häufiger bei milden und mittelschweren Formen der Krankheit auf. Bei schweren und malignen Formen ist die Konzentration von HBsAg im Blut oft niedrig und bei 20% der Patienten mit schwerer Form und bei 30% mit einem malignen Antigen im Blut überhaupt nicht nachgewiesen. Das Auftreten auf diesem Hintergrund bei Patienten mit Antikörpern gegen HBsAg wird als ungünstiges diagnostisches Zeichen angesehen. es wird bei malignen Formen der Hepatitis B festgestellt.

Im akuten Verlauf der Hepatitis B nimmt die Konzentration von HBsAg im Blut allmählich ab, bis dieses Antigen vollständig verschwunden ist. HBsAg verschwindet bei den meisten Patienten innerhalb von 3 Monaten nach Beginn einer akuten Infektion.

Eine Abnahme der HBsAg-Konzentration um mehr als 50% am Ende der 3. Woche der akuten Periode weist in der Regel auf einen nahen Abschluss des Infektionsvorgangs hin. Bei Patienten mit einer hohen Konzentration an HBsAg in der Höhe der Erkrankung wird sie normalerweise für mehrere Monate im Blut nachgewiesen.
Bei Patienten mit niedrigen HBsAg-Konzentrationen verschwindet sie viel früher (manchmal mehrere Tage nach Beginn der Erkrankung). Im Allgemeinen liegt der Zeitpunkt der HBsAg-Erkennung zwischen mehreren Tagen und 4 bis 5 Monaten. Die maximale Erfassungsdauer von HBsAg mit einem glatten Verlauf der akuten Hepatitis B überschreitet 6 Monate ab dem Beginn der Krankheit nicht.

HBsAg kann bei gesunden Menschen in der Regel in prophylaktischen oder zufälligen Studien gefunden werden. In solchen Fällen werden andere Marker für virale Hepatitis B, Anti-HBcAg-JgM, Anti-HBcAg-JgG, Anti-HBeAg und die Leberfunktion untersucht.

Bei negativen Ergebnissen sind wiederholte Studien zu HBsAg erforderlich.
Wenn wiederholte Blutuntersuchungen für mehr als 3 Monate HBsAg ergeben, wird dieser Patient als chronischer Patient mit Virushepatitis B eingestuft.
Die Anwesenheit von HBsAg ist ziemlich üblich. Es gibt mehr als 300 Millionen Fluggesellschaften in der Welt und in unserem Land gibt es etwa 10 Millionen Fluggesellschaften.
Die Beendigung des HBsAg-Kreislaufs mit nachfolgender Serokonversion (Bildung von Anti-HBs) zeigt immer eine Erholung - Sanierung des Körpers an.

Ein Bluttest auf HBsAg wird für folgende Zwecke verwendet:

zur Diagnose einer akuten Hepatitis B:

• Inkubationszeit;
• akute Krankheit;
• frühe Genesung;
  

zur Diagnose einer chronischen Virushepatitis B;

bei Krankheiten:

• persistierende chronische Hepatitis;
• Leberzirrhose;

zum Screening und zur Identifizierung von Patienten in Risikogruppen:

Patienten mit häufigen Hämotransfusionen;

Patienten mit chronischem Nierenversagen;

Patienten mit multipler Hämodialyse;

Patienten mit Immunschwäche, einschließlich AIDS.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Die Ergebnisse der Studie werden qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis zeigt das Fehlen von Serum-HBsAg an. Ein positives Ergebnis - die Identifizierung von HBsAg weist auf eine Inkubation oder akute Periode einer akuten Virushepatitis B sowie auf eine chronische Virushepatitis B hin.

Antikörper gegen das nukleare Antigen des Hepatitis-B-Virus JgG (Anti-HBcAg JgG)

Normalerweise fehlt Serum Anti-HBcAg im Serum.
Bei Patienten mit Anti-HBcAg tritt JgG in der akuten Phase der Virushepatitis B auf und bleibt während des gesamten Lebens bestehen. Anti-HBcAg JgG ist der führende Marker für übertragenes HBV.

Blutuntersuchungen auf Anti-HBcAg JgG werden durchgeführt, um Folgendes zu diagnostizieren:

chronische Virushepatitis B in Gegenwart von HBs-Antigen im Serum;

Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis weist auf das Fehlen von Serum-Anti-HBcAg-JgG hin. Ein positives Ergebnis - die Identifizierung von Anti-HBcAg-JgG weist auf eine akute Infektion, eine Rekonvaleszenz oder eine zuvor übertragene Virushepatitis B hin.

Hepatitis-B-Virus "e" -Antigen (HBeAg)

Normalerweise fehlt HBeAg im Serum.
HBeAg kann im Serum der meisten Patienten mit akuter Virushepatitis B gefunden werden. Es verschwindet normalerweise vor dem HBs-Antigen im Blut. Ein hoher HBeAg-Spiegel in den ersten Wochen der Erkrankung oder ein Nachweis über mehr als 8 Wochen gibt Anlass zu einer chronischen Infektion.

Dieses Antigen wird häufig bei chronisch aktiver Hepatitis viraler Ätiologie nachgewiesen. Von besonderem Interesse bei der Definition von HBeAg ist die Tatsache, dass seine Detektion die aktive replikative Phase des Infektionsprozesses charakterisiert. Es wurde festgestellt, dass hohe HBeAg-Konzentrationen einer hohen DNA-Polymerase-Aktivität entsprechen und die aktive Replikation des Virus kennzeichnen.

Die Anwesenheit von HBeAg im Blut zeigt seine hohe Infektiosität an, d. H. das Vorhandensein einer aktiven Hepatitis-B-Infektion im untersuchten Körper und wird nur in Gegenwart von HBs-Antigen im Blut nachgewiesen. Bei Patienten mit chronischer aktiver Hepatitis werden antivirale Medikamente nur verwendet, wenn HBeAg im Blut nachgewiesen wird. HBeAg - Antigen - ein Marker für die akute Phase und die Replikation des Hepatitis-B-Virus.

Bei einem Bluttest auf HBe-Antigen wird Folgendes diagnostiziert:

Inkubationszeit der Virushepatitis B;

Prodromalperiode der Virushepatitis B;

akute Periode der viralen Hepatitis B;

chronische persistierende Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis zeigt das Fehlen von Serum-HBeAg an. Ein positives Ergebnis - der Nachweis von HBeAg weist auf eine Inkubation oder akute Periode einer akuten Virushepatitis B oder auf die fortgesetzte Replikation des Virus und die Infektiosität des Patienten hin.

Antikörper gegen das Antigen "e" des Hepatitis-B-Virus (Anti-HBeAg)

Anti-HBeAg im Serum ist normalerweise nicht vorhanden. Das Auftreten von Anti-HBeAg-Antikörpern weist in der Regel auf eine intensive Entfernung des Hepatitis-B-Virus aus dem Körper und eine geringfügige Infektion des Patienten hin.

Diese Antikörper treten in der Akutphase auf und bleiben bis zu 5 Jahre nach der Infektion bestehen. Bei chronisch-persistierender Hepatitis wird Anti-HBeAg zusammen mit HBsAg im Blut des Patienten gefunden. Serokonversion, d.h. der Übergang von HBeAg zu Anti-HBeAg bei chronisch aktiver Hepatitis ist zwar häufig prognostisch günstiger, aber dieselbe Serokonversion verbessert die Prognose einer schweren Leberzirrhotentransformation nicht.

Bei der Diagnose einer Virushepatitis B werden in folgenden Fällen Blutuntersuchungen auf Anti-HBeAg durchgeführt:

Feststellung des Anfangsstadiums der Krankheit;

akute Infektion;

frühe Genesung;

Genesung;

Erholung im späten Stadium.

Diagnose der kürzlich übertragenen Virushepatitis B;

Diagnose einer chronischen persistierenden Virushepatitis B.

Bewertung der Forschungsergebnisse

Das Ergebnis der Studie wird qualitativ ausgedrückt - positiv oder negativ. Ein negatives Ergebnis weist auf das Fehlen von Antikörpern gegen HBeAg im Serum hin. Ein positives Ergebnis ist der Nachweis von Antikörpern gegen HBeAg, die auf das Anfangsstadium der akuten Virushepatitis B, die akute Infektionsperiode, das frühe Stadium der Genesung, der Genesung, der kürzlich übertragenen Virushepatitis B oder der persistenten Virushepatitis B hindeuten können.

Die Kriterien für das Vorliegen einer chronischen Hepatitis B sind:

Nachweisen oder periodischer Nachweis von HBV-DNA im Blut;

kontinuierliche oder periodische Erhöhung der Aktivität von ALT / AST im Blut;

morphologische Anzeichen einer chronischen Hepatitis bei der histologischen Untersuchung der Leberbiopsie.

Nachweis des Hepatitis-B-Virus mittels PCR (qualitativ)

Das Hepatitis-B-Virus im Blut fehlt normalerweise.
Die qualitative Bestimmung des Hepatitis-B-Virus durch die PCR-Methode im Blut ermöglicht es, das Vorhandensein des Virus im Körper des Patienten zu bestätigen und damit die Ätiologie der Krankheit festzulegen.

Diese Studie liefert nützliche Informationen für die Diagnose einer akuten Virushepatitis B in den Inkubations- und frühen Entwicklungsstadien der Krankheit, wenn die wichtigsten serologischen Marker des Patienten im Blut fehlen. Serumvirale DNA wird bei 50% der Patienten in Abwesenheit von HBeAg nachgewiesen. Die analytische Empfindlichkeit der PCR-Methode beträgt nicht weniger als 80 Viruspartikel in 5 μl, die letzte DNA-Nachweisprobe, Spezifität - 98%.

Diese Methode ist wichtig für die Diagnose und Überwachung des Verlaufs von chronischem HBV. Etwa 5-10% der Fälle von Zirrhose und anderen chronischen Lebererkrankungen werden durch einen chronischen Träger des Hepatitis-B-Virus verursacht.Marker für die Aktivität solcher Erkrankungen sind das Vorhandensein von HBeAg und DNA des Hepatitis-B-Virus im Blut.

Die PCR-Methode ermöglicht es, die DNA des Hepatitis-B-Virus sowohl qualitativ als auch quantitativ im Blut zu bestimmen. Das bestimmte Fragment ist in beiden Fällen die eindeutige DNA-Sequenz des Gens des Strukturproteins des Hepatitis-B-Virus.

Der Nachweis von Hepatitis-B-Virus-DNA in Biomaterial mittels PCR ist erforderlich für:

Auflösung fragwürdiger serologischer Testergebnisse;

Erkennung des akuten Stadiums der Krankheit im Vergleich zu einer früheren Infektion oder einem früheren Kontakt;

die Wirksamkeit der antiviralen Behandlung kontrollieren.

Das Verschwinden der Hepatitis-B-DNA aus Blut ist ein Zeichen für die Wirksamkeit der Therapie

Nachweis des Hepatitis-B-Virus mittels PCR (quantitativ)

Diese Methode liefert wichtige Informationen über die Intensität der Krankheitsentwicklung, die Wirksamkeit der Behandlung und die Entwicklung von Resistenzen gegen aktive Wirkstoffe.
Für die Diagnose einer Virushepatitis mittels PCR in Serum werden Testsysteme verwendet, deren Empfindlichkeit 50-100 Kopien in einer Probe beträgt, was es ermöglicht, das Virus in einer Konzentration von 5 · 10 ^ 3 - 10 ^ 4 Kopien / ml nachzuweisen. Die PCR bei der Virushepatitis B ist auf jeden Fall für die Beurteilung der Virusreplikation notwendig.

Serumvirale DNA wird bei 50% der Patienten in Abwesenheit von HBeAg nachgewiesen. Blutserum, Lymphozyten und Hepatobiopsie können als Material zum Nachweis der DNA des Hepatitis-B-Virus dienen.

• Die Virämie wird wie folgt bewertet:
• weniger als 2.10 5 Kopien / ml (weniger als 2.10 5 IE / ml) - niedrige Virämie;
• 2.10 5 Kopien / ml (2.10 5 IE / ml) bis 2.10 6 Kopien / ml (8.10 5 IE / ml) - mittlere Virämie;
• mehr als 2,10 ^ 6 Kopien / ml - hohe Virämie.

Es besteht ein Zusammenhang zwischen dem Ergebnis einer akuten Virushepatitis B und der Konzentration von HBV-DNA im Blut eines Patienten. Bei einem niedrigen Virämiepegel ist der Verlauf der Chronisierung der Infektion nahe null, bei einem Durchschnitt ist der Prozess bei 25 bis 30% der Patienten chronisch, und bei einem hohen Virämiepegel wird akute Virushepatitis B häufig chronisch.

Die Indikationen für die Behandlung von chronischem HBV-Interferon-alpha sollten als Vorhandensein von Markern für eine aktive Virusreplikation betrachtet werden (Nachweis von HBV-HBV-, HBeAg- und HBV-DNA im Blutserum während der vorangegangenen 6 Monate).

Die Kriterien für die Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung sind das Verschwinden der HBEAg- und HBV-DNA im Blut, die normalerweise mit einer Normalisierung der Transaminase-Spiegel und einer langfristigen Remission der Krankheit einhergeht. Bei 80% der Patienten verschwindet die HBV-DNA im 5. Monat der Behandlung aus dem Blut. Die Verringerung des Virämiepegels um 85% oder mehr am dritten Tag nach Behandlungsbeginn im Vergleich zum Ausgangswert ist ein schnelles und ziemlich genaues Kriterium für die Vorhersage der Wirksamkeit der Therapie.